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本试剂盒是根据最常用的两种蛋白浓度检测方法之一Bradford法研制而成，实现了蛋白浓度测定的快速、稳定和高灵敏度，并且检测数据有很好的线性关系。

Bradford法的检测原理是考马斯亮蓝G-250与蛋白质的碱性和芳香族氨基酸特别是精氨酸(Arginine)在酸性介质中结合后，溶液转变为蓝色，溶液最大吸收峰从465nm迁移到595nm，颜色的变化与蛋白质浓度成正比。因此，可通过检测595nm处的吸光度对溶液中蛋白质浓度进行测定。

与测定蛋白浓度的其它方法如BCA法和Lowry相比，Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，尤其是还原试剂的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M，DTT的浓度可高达5mM。但本试剂盒受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20、60、80低于0.015%。含去垢剂的样品推荐使用我公司的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂兼容型，货号：YTB0034)或BCA蛋白浓度测定试剂盒(货号：YT036、YT037)。

• 本试剂盒检测速度极快，10～20个样品只需不足10分钟即可完成，和BCA法相比大大缩短了检测时间。
  
• 本试剂盒检测灵敏度高，最小蛋白检测量达到0.5μg。
  
• 本试剂盒标准曲线的线性关系好。常规的Bradford法的标准曲线是非线性的。本试剂盒进行了精心优化，确保5μL体积的样品或标准品在0.1～1.5mg/ml浓度范围内有良好的线性关系(参考图1)。
  
  图1.本试剂盒蛋白标准曲线的实测效果图。图中数据仅供参考，实际的检测效果可能会略有不同。

• 蛋白标准请在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。
  
• 将G250染色液回复到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。
  
• 需可检测560～610nm之间波长的酶标仪一台，最佳检测波长为595nm。并需96孔板。
  
• 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 蛋白标准的准备
  
  • 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质，也可以用0.9%NaCl、PBS或水稀释标准品。蛋白标准(5mg/ml BSA)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。
    
  • 按照下表配制0、0.125、0.25、0.5、0.75、1、1.5mg/ml蛋白标准。每次稀释时注意充分混匀。如果有必要可以增加设置0.0625mg/ml的蛋白标准。
    

    编号	稀释液体积	标准品体积	最终浓度
    A	70μL	5mg/ml BSA 30μL	1.5mg/ml
    B	30μL	从A管取60μL	1mg/ml
    C	20μL	从B管取60μL	0.75mg/ml
    D	30μL	从C管取60μL	0.5mg/ml
    E	60μL	从D管取60μL	0.25mg/ml
    F	60μL	从E管取60μL	0.125mg/ml
    G	60μL	0μL	0mg/ml

• 蛋白浓度测定
  
  • 取5μL不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。
    
  • 取5μL样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足5μL，需加标准品稀释液补足到5μL。请注意记录样品体积。
    
  • 各孔加入250μL G250染色液。
    
  • 用酶标仪测定A595，或560～610nm之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度，也可以在2小时内测定，2小时内检测数据无显著变化。
    
  • 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品中的蛋白浓度。