产品货号:
WE0275
中文名称:
Bradford蛋白定量试剂盒
英文名称:
Ultra Bradford Protein Assay Kit
产品规格:
800T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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Bradford法是最简单和快速的比色蛋白定量方法。这一方法基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后,产生蓝色化合物,反应迅速而稳定。反应化合物在465~595nm处有最大的光吸收值,化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系,因此可通过检测595nm的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。本制品将传统的Bradford方法进行了改良,最大限度的加大蛋白定量的线性范围,变异性小于普通考马斯亮蓝染色法,灵敏度范围为100-1,500μg/mL。使用本制品反应迅速,颜色产物1小时内保持稳定。本试剂盒适用于多种缓冲液系统,不受金属离子、还原剂和螯合剂的干扰。
组成 | 规格 |
Bradford Protein Assay Reagent | 2×100mL |
BSA Standard Solution(2mg/mL) | 2mL |
保存:2~8℃
本试剂盒提供的组分可提供800个微孔检测或100管检测。
- BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释)。
- 本试剂盒不适合含有去污剂的蛋白定量,具体干扰物质(具体见附表1),可采用BCA蛋白定量试剂盒(WE0276)或其他蛋白定量产品。
- 所测蛋白分子量必须大于3kD。
- 稀释BSA标准品:用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
管号 稀释液用量(μl) BSA标准品用量(μl) BSA标准品最终浓度(μg/ml) A 0 100 2000 B 50 150 1500 C 200 200 1000 D 200 200(从C管中取) 500 E 200 200(从D管中取) 250 F 200 200(从E管中取) 125 G 200 0 0(空白) - 试管检测(检测范围:100~1500μg/mL)
- 按上表稀释标准品,将30μL稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。
- 取干净的试管,分别加入30μL待测蛋白样品(原液或稀释液),并作好标记,推荐每个测定做2~3个平行反应。
- 向步骤a和步骤b的试管中各加入1.5mL Bradford Protein Assay Reagent,充分混匀,室温放置10分钟。
- 用分光光度计测定595nm处的吸光值。
- 绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。
注意:数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得,实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线,可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。 - 如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。
- 按上表稀释标准品,将30μL稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。
- 微孔检测(检测范围:100~1500μg/mL)
- 将按表1稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各5μL分别加到作好标记的96孔板微孔中。
- 每孔加入250μL Bradford Protein Assay Reagent,充分混匀,盖上96孔板盖,室温放置10分钟。
- 用酶标仪测定595nm处的吸光值。
- 绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。
注意:数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得,实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线,可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。 - 如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。
- 将按表1稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各5μL分别加到作好标记的96孔板微孔中。
附表1.干扰物质表
种类 | 物质 | 耐受浓度 | 种类 | 物质 | 耐受浓度 | |
缓冲液 | 乙酸盐 | 0.6M | 去垢剂和变性剂 | Brij35 | 干扰 | |
甘氨酸 | 0.1M | 脱氧胆酸纳 | 0.25% | |||
HEPES | 0.1M | CHAPS | 1% | |||
MES | 0.7M | NP-40 | 干扰 | |||
MOPS | 0.2M | 辛葡糖 | 2% | |||
Na+-柠檬酸 | 50mM | SDS | 0.10% | |||
PIPES | 500mM | Tween-20 | 干扰 | |||
磷酸钠/磷酸钠 | 1M | Triton X-100 | 0.10% | |||
乙酸钠 | 0.6M | 糖类 | 蔗糖 | 1mM | ||
Tris | 2M | 螯合剂 | EDTA | 100mM | ||
盐类 | 硫酸铵 | 1M | EGTA | 50mM | ||
NaCl | 1M | 其他 | HCl | 0.1M | ||
尿素 | 6M | NaOH | 0.1M | |||
极性化合物 | 甘油 | 99% | NAD | 1mM | ||
还原剂 | β-巯基乙醇 | 1M | 苯 | 5% | ||
DTT | 1M |
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