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本制品是DEAE弱阴离子交换层析填料FF的中压预装柱，规格为5mL，该预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如?KTA等，方便客户操作。

DEAE弱阴离子交换层析填料FF以高度交联的6%琼脂糖为基架，可耐受较高的流速及更高的化学稳定性，适合实验室及工业大规模纯化。本品带电基团-N⁺(C₂H₅)₂H。

• 请勿冷冻保存本制品。
  
• 为了得到良好的分离效果，避免缓冲液与层析柱有太大温差变化。
  
• 层析柱可以放在层析冷柜中使用，但是需要适当降低流速。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本制品仅作科研用途！

• 缓冲液的准备
  应选择缓冲基团不与介质作用的缓冲盐，平衡缓冲液宜采用低盐和低pH(通常低于目的物等电点1个pH单位)缓冲液以有利于目的物的结合，同时需要考虑目的物在缓冲液中的稳定性。洗脱缓冲液通常为在平衡缓冲液中加入高浓度盐(如1M NaCl)的缓冲液或高pH洗脱。所用水和Buffer在使用前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
  表1：阴离子交换缓冲液
  

  pH范围	缓冲盐	浓度(mM)	平衡离子	pKa(25℃)
  4.3-5.3	N-Methylpiperazine	20	Cl-	4.75
  4.8-5.8	Piperazine	20	Cl-或HCOO-	5.33
  5.5-6.5	L-Histidine	20	Cl-	6.04
  6.0-7.0	bis-Tris	20	Cl-	6.48
  6.2-7.2	bis-Tris propane	20	Cl-	6.65
  7.3-8.3	Triethanolamine	20	Cl-或CH3COO-	7.76
  7.6-8.6	Tris	20	Cl-	8.07
  8.0-9.0	N-Methyl-diethanolamine	20	SO42-	8.52
  8.0-9.0	N-Methyl-diethanolamine	50	Cl-或CH3COO-	8.52
  8.4-9.4	Diethanolamine	50	Cl-	8.88
  8.4-9.4	Propane 1,3-Diamino	20	Cl-	8.88
  8.6-9.6	bis-Tris propane	20	Cl-	9.10
  9.0-10.0	Ethanolamine	20	Cl-	9.50
  9.2-10.2	Piperazine	20	Cl-	9.73
  10.0-11.0	Propane 1,3-Diamino	20	Cl-	10.55
  10.6-11.6	Piperidine	20	Cl-	11.12

  
  
• 样品准备
  样品在使用前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
  
• 样品纯化
  
  • 将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
    
  • 用3～5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。
    
  • 使用至少5倍柱床体积的结合Buffer平衡色谱柱。
    
  • 利用泵或注射器上样。
    注：样品的粘度增加使得即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
    
  • 用洗杂Buffer冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10～15个柱体积)。
    
  • 用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液就足够了。可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
• 填料清洗
  离子交换填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。
  CIP(Cleaning In Place)清洗
  离子交换填料可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对填料进行清洗。
  
  • 去除一些沉淀或变性物质
    用2倍柱体积的1M NaOH溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。
    
  • 去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
    用3～4倍柱体积的70%乙醇或3～4倍柱体积的1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。
    
  • 去除一些离子键结合物质
    用3～4倍柱体积的2M NaCl清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。