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DEAE弱阴离子纯化柱(1mL)图片
产品货号:
SY0419
中文名称:
DEAE弱阴离子纯化柱(1mL)
英文名称:
DEAE 6FF Chromatography Column,1mL
产品规格:
1ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是DEAE弱阴离子交换层析填料FF的中压预装柱,规格为1mL,该预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如?KTA等,方便客户操作。


离子交换主要包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换和弱阴离子交换4种,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。


DEAE弱阴离子交换层析填料FF以高度交联的6%琼脂糖为基架,可耐受较高的流速及更高的化学稳定性,适合实验室及工业大规模纯化。本品带电基团-N+(C2H5)2H。




基质高度交联的6%琼脂糖微球
粒径45~165μm
离子交换类型弱阴离子
载量~0.11~0.16mmol Cl-/mL基质
耐压0.3 MPa
建议流速300-600cm/h
pH范围2-12(长期)/2-14(短期)
储存缓冲液20%乙醇
柱子尺寸0.7×2.5cm(1mL)



组分规格
DEAE弱阴离子纯化柱(1mL)1支
说明书1份

保存:2~8℃,有效期2年。


  • 请勿冷冻保存本制品。
  • 为了得到良好的分离效果,避免缓冲液与层析柱有太大温差变化。
  • 层析柱可以放在层析冷柜中使用,但是需要适当降低流速。
  • 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  • 本制品仅作科研用途!



  • 缓冲液的准备
    应选择缓冲基团不与介质作用的缓冲盐,平衡缓冲液宜采用低盐和低pH(通常低于目的物等电点1个pH单位)缓冲液以有利于目的物的结合,同时需要考虑目的物在缓冲液中的稳定性。洗脱缓冲液通常为在平衡缓冲液中加入高浓度盐(如1M NaCl)的缓冲液或高pH洗脱。所用水和Buffer在使用前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
    表1:阴离子交换缓冲液
    pH范围缓冲盐浓度(mM)平衡离子pKa(25℃)
    4.3-5.3N-Methylpiperazine20Cl-4.75
    4.8-5.8Piperazine20Cl-或HCOO-5.33
    5.5-6.5L-Histidine20Cl-6.04
    6.0-7.0bis-Tris20Cl-6.48
    6.2-7.2bis-Tris propane20Cl-6.65
    7.3-8.3Triethanolamine20Cl-或CH3COO-7.76
    7.6-8.6Tris20Cl-8.07
    8.0-9.0N-Methyl-diethanolamine20SO42-8.52
    8.0-9.0N-Methyl-diethanolamine50Cl-或CH3COO-8.52
    8.4-9.4Diethanolamine50Cl-8.88
    8.4-9.4Propane 1,3-Diamino20Cl-8.88
    8.6-9.6bis-Tris propane20Cl-9.10
    9.0-10.0Ethanolamine20Cl-9.50
    9.2-10.2Piperazine20Cl-9.73
    10.0-11.0Propane 1,3-Diamino20Cl-10.55
    10.6-11.6Piperidine20Cl-11.12

  • 样品准备
    样品在使用前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
  • 样品纯化
    • 将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。
    • 用3~5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。
    • 使用至少5倍柱床体积的结合Buffer平衡色谱柱。
    • 利用泵或注射器上样。
      注:样品的粘度增加使得即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。
    • 用洗杂Buffer冲洗柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10~15个柱体积)。
    • 用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液就足够了。可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。
  • 填料清洗
    离子交换填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗,然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。
    CIP(Cleaning In Place)清洗
    离子交换填料可以重复使用而无需再生,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,这时可按照下面方法对填料进行清洗。
    • 去除一些沉淀或变性物质
      用2倍柱体积的1M NaOH溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。
    • 去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
      用3~4倍柱体积的70%乙醇或3~4倍柱体积的1% Triton X-100清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。
    • 去除一些离子键结合物质
      用3~4倍柱体积的2M NaCl清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。



问题可能原因推荐解决方案
柱子反压过高填料被堵塞按照【填料清洗】部分对填料进行清洗。
样品中含有微小的固体颗粒,建议使用前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
洗脱样品较杂填料重复多次使用按照【填料清洗】部分对填料进行清洗或更换新填料。
平衡不充分增加平衡液体积,确保填料充分平衡/洗杂。

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