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本制品为DEAE弱阴离子交换树脂，以高度交联的6%琼脂糖为介质，可耐受较高的流速及更高的化学稳定性，适合实验室及工业大规模纯化。本品离子交换基团-N+(C2H5)2H。

• 请勿冷冻保存本制品。
  
• 填料使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
  
• 所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本制品仅作科研用途！

• 缓冲液的准备
  所用水和Buffer在使用前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
  
• 样品准备
  样品在使用前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
  
• 装柱(使用储液器装填)
  
  • 用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2cm的去离子水。
    
  • 将树脂悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
    
  • 如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。
    
  • 打开层析柱底部出口，开起泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用你所使用泵的最大流速，这样也可以得到一个很好的装填效果(注：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%)。当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
    
  • 关闭泵，关闭层析柱出口。
    
  • 如果使用储液器，去除储液器，将分配器至于层析柱中。
    
  • 将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。
    
  • 将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
• 样品纯化
  
  • 将介质装入合适的层析柱，层析用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
    
  • 将样品加到平衡好的DEAE Agarose 6FF中(保证目的蛋白与填料充分接触，提高目的蛋白的回收率)，收集流出液。
    
  • 用10～15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
    
  • 使用5～10倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
    
  • 依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。
• SDS-PAGE检测
  将得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。
  
• 填料清洗
  离子交换树脂每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。
  CIP(Cleaning In Place)清洗
  离子交换树脂可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。
  
  • 去除一些沉淀或变性物质
    用2倍柱体积的1M NaOH溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。
    
  • 去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
    用3～4倍柱体积的70%乙醇或3～4倍柱体积的1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。
    
  • 去除一些离子键结合物质
    用3～4倍柱体积的2M NaCl清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。