产品货号:
SY0401
中文名称:
MBP标签蛋白纯化树脂
英文名称:
MBPar Dextrin Agarose Resin 6FF
产品规格:
5ml|25ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白的亲和层析介质,MBP可促进连接蛋白的正确折叠,增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。MBPar Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白,结合的融合蛋白可以用10mM麦芽糖进行温和洗脱,保护了目的蛋白的活性,MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。
本制品以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,具有更高的物理化学特性,可以耐受更高的压力,在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化,更适于工业大规模蛋白的纯化。
基质 | 高度交联的6%琼脂糖微球 |
配体 | 糊精 |
粒径 | 45~165μm |
载量 | >10mg MBP蛋白(80kDa) |
最大压力 | 0.3 MPa,3bar |
pH稳定范围 | 3-12 |
储存缓冲液 | 20%乙醇 |
组分 | 5mL | 25mL |
MBP标签蛋白纯化树脂 | 5mL | 25mL |
说明书 | 1份 | 1份 |
保存:2~8℃,有效期2年。
注意事项
- 请勿冷冻保存本制品。
- MBPar Dextrin Agarose Resin6FF使用前一定要充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。
- 所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 本制品仅作科研用途!
- 所用水和Buffer在使用前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤除菌。
- 结合/洗杂缓冲液:20mM Tris-HCl,200mM NaCl,1mM EDTA,pH7.4
- 洗脱缓冲液:20mM Tris-HCl,1mM EDTA,10mM麦芽糖,pH7.4
注:结合/洗杂缓冲液或者洗脱缓冲液中可加入1mM DTT或10mM β-巯基乙醇。
样品在上样前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子。
- MBPar Dextrin Agarose Resin的装填(适用于各种中压色谱层析柱的填装)
- 用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出1-2cm的去离子水。
- 将树脂悬浮起来,小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
- 如果使用储液器,应立即在层析柱和储液器中加满水,将进样分配器放置于浆液表面,连接至泵上,避免在分配器或进样管中产生气泡。
- 打开层析柱底部出口,开起泵,使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流速,这样可避免液压对所形成柱床的冲击,避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速,可以用所使用泵的最大流速,这样也可以得到一个很好的装填效果。
注:在随后的色谱程序中,不要超过最大装柱流速的75%,当柱床高度稳定后,在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。 - 关闭泵,关闭层析柱出口。
- 如果使用储液器,去除储液器,将分配器至于层析柱中。
- 将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器,锁紧分配器接头。
- 将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中,开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
- 用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出1-2cm的去离子水。
- 样品纯化
- 平衡:用5倍柱体积的结合Buffer平衡柱子,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
- 上样:Resin平衡后,加入蛋白样品,使其与Resin充分接触,提高目的蛋白回收率,收集流出液。
- 洗杂:用10~15倍柱体积的洗杂缓冲液进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
- 洗脱:使用5~10倍柱体积的洗脱缓冲液,收集洗脱液,即目的蛋白溶液。
- 清洗与保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%乙醇中,置于4℃保存,防止填料被细菌污染。
- 平衡:用5倍柱体积的结合Buffer平衡柱子,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
- SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。 - 填料清洗
随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集,会造成流速和结合载量性能下降,此时需对填料进行清洗。- 3倍柱体积的去离子水;
- 3倍柱体积的0.1%SDS或0.5M NaOH溶液;
- 3倍柱体积去离子水;
- 3倍柱体积20%乙醇,保存于4℃。
- 3倍柱体积的去离子水;
问题 | 可能原因 | 推荐解决方案 |
柱子反压过高 | 填料被堵塞 | 清洗树脂。 |
裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上样前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,或离心去除。 | ||
洗脱组分中无目的蛋白 | 目的蛋白未表达 | 优化实验方案,确保目的蛋白表达 |
样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂 | 样品透析或用结合buffer稀释 | |
细胞产生大量的淀粉酶影响结合力 | 培养基中添加葡萄糖,抑制淀粉酶的表达 | |
融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲影响了目的蛋白的结合力 | 更换载体 | |
柱子结合时间太短 | 将样品与树脂振荡孵育4℃2h或更长时间 | |
洗脱样品较杂 | 目的蛋白降解 | 加一些蛋白酶抑制剂,如PMSF、EDTA等 |
平衡/洗杂不充分 | 增加平衡液体积,确保树脂充分平衡/洗杂。 |
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