产品货号:
SY0369
中文名称:
重组肠激酶(无标签)
英文名称:
Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli
产品规格:
100U|200U|500U|1000U|5000U
发货周期:
1~3天
产品价格:
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重组肠激酶(rEK)是高纯度的牛肠激酶轻链亚基,它有着和天然提取的肠激酶同样特异的切割酶活性,切割位点Asp-Asp-Asp-Asp-Lys,可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合标签,本rEK具有比天然酶更高的切割活性。
本制品为采用重组大肠杆菌分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶,适用范围广,并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本制品不含标签,由于具有极高酶切活性,酶切反应使用量少,不影响下游蛋白应用,故后续不需将其去除。
本制品用LAL法测定内毒素含量小于1 EU/μg,理论分子量为25.850kDa。
一个活性单位定义为25℃,12-16h,在25mM Tris-HCl,Ph 8.0缓冲体系下,将500μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白切开95%所需要的酶量
组分 | 100U | 200U | 500U | 1000U | 5000U |
重组肠激酶(12U/μL) | 100U | 200U | 500U | 1000U | 5000U |
说明书 | 1份 |
保存:20℃,尽量避免反复冻融,有效期2年。
经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;本制品中不含有非特异性的蛋白酶切活性
重组肠激酶在以下条件酶活会被抑制:
试剂 | 浓度 |
尿素 | >2M |
NaCl | >200mM |
β-ME | >20mM |
SDS | >0.1% |
咪唑 | >50mM |
甘油 | >5% |
- 配制反应体系
融合蛋白 0.05~0.1mg(蛋白浓度:0.1~1mg/mL) 肠激酶 0.1~0.2U 缓冲体系 25mM Tris-HCL 8.0
注:- 重组肠激酶可使用25mM Tris-HCl pH8.0稀释成每1μL含0.1单位的溶液使用。
- 缓冲液的使用体积等比例融合蛋白和酶使用量的总和。
- 重组肠激酶可使用25mM Tris-HCl pH8.0稀释成每1μL含0.1单位的溶液使用。
- 25℃过夜酶切。
注:完全酶切需要16-24h,该酶效力高且待切蛋白结构性质不同,建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。
- 本制品所讲述的缓冲体系需要自行配置。
- 在>200mM咪唑,或>200mM NaCl,或>5%甘油,酶切会受到影响。如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种,为获得理想的酶切结果,请先将样品透析到25mM Tris-HCl 8.0缓冲液中,然后再进行酶切实验;若不方便透析,可将样品稀释,使得各组分低于干扰浓度后再酶切,酶的用量与蛋白比例不变;若干扰因素很多,且不便去除,需要适当增加酶量或延长酶切时间,有助于得到理想的酶切效果。
- 磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用,痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性,因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
- 本品是具有高酶活力重组肠激酶,切割蛋白使用量少,可不考虑除去。
- 蛋白酶切效果不好,可适当增加酶量,或适当延长酶切时间。
- 如果需要去除重组肠激酶,该如何去除?
本品不含标签,后续如需去除重组肠激酶,可用阴离子交换树脂(例如DEAE-FF)对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下:
平衡缓冲液:25mM Tris-HCl pH8.0
洗脱缓冲液:25mM Tris-HCl pH8.0,含100mM NaCl
注:
① 如果使用纯化柱,注意流速不要太快。确保样品与胶的接触时间不少于10min。也可以直接将胶加入到酶切缓冲液中直接动态吸附30min。
② 如酶切缓冲液中含有其他成分,如NaCl,甘油等,会影响吸附效果。
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