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重组肠激酶(无标签)图片
产品货号:
SY0369
中文名称:
重组肠激酶(无标签)
英文名称:
Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli
产品规格:
100U|200U|500U|1000U|5000U
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

重组肠激酶(rEK)是高纯度的牛肠激酶轻链亚基,它有着和天然提取的肠激酶同样特异的切割酶活性,切割位点Asp-Asp-Asp-Asp-Lys,可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合标签,本rEK具有比天然酶更高的切割活性。


本制品为采用重组大肠杆菌分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶,适用范围广,并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本制品不含标签,由于具有极高酶切活性,酶切反应使用量少,不影响下游蛋白应用,故后续不需将其去除。


本制品用LAL法测定内毒素含量小于1 EU/μg,理论分子量为25.850kDa。




一个活性单位定义为25℃,12-16h,在25mM Tris-HCl,Ph 8.0缓冲体系下,将500μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白切开95%所需要的酶量


组分100U200U500U1000U5000U
重组肠激酶(12U/μL)100U200U500U1000U5000U
说明书1份

保存:20℃,尽量避免反复冻融,有效期2年。


经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;本制品中不含有非特异性的蛋白酶切活性


重组肠激酶在以下条件酶活会被抑制:
试剂浓度
尿素>2M
NaCl>200mM
β-ME>20mM
SDS>0.1%
咪唑>50mM
甘油>5%



  • 配制反应体系
    融合蛋白0.05~0.1mg(蛋白浓度:0.1~1mg/mL)
    肠激酶0.1~0.2U
    缓冲体系25mM Tris-HCL 8.0

    注:
    • 重组肠激酶可使用25mM Tris-HCl pH8.0稀释成每1μL含0.1单位的溶液使用。
    • 缓冲液的使用体积等比例融合蛋白和酶使用量的总和。
  • 25℃过夜酶切。
    注:完全酶切需要16-24h,该酶效力高且待切蛋白结构性质不同,建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。



  • 本制品所讲述的缓冲体系需要自行配置。
  • 在>200mM咪唑,或>200mM NaCl,或>5%甘油,酶切会受到影响。如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种,为获得理想的酶切结果,请先将样品透析到25mM Tris-HCl 8.0缓冲液中,然后再进行酶切实验;若不方便透析,可将样品稀释,使得各组分低于干扰浓度后再酶切,酶的用量与蛋白比例不变;若干扰因素很多,且不便去除,需要适当增加酶量或延长酶切时间,有助于得到理想的酶切效果。
  • 磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用,痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性,因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
  • 本品是具有高酶活力重组肠激酶,切割蛋白使用量少,可不考虑除去。
  • 蛋白酶切效果不好,可适当增加酶量,或适当延长酶切时间。



  • 如果需要去除重组肠激酶,该如何去除?
    本品不含标签,后续如需去除重组肠激酶,可用阴离子交换树脂(例如DEAE-FF)对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下:
    平衡缓冲液:25mM Tris-HCl pH8.0
    洗脱缓冲液:25mM Tris-HCl pH8.0,含100mM NaCl
    注:
    ① 如果使用纯化柱,注意流速不要太快。确保样品与胶的接触时间不少于10min。也可以直接将胶加入到酶切缓冲液中直接动态吸附30min。
    ② 如酶切缓冲液中含有其他成分,如NaCl,甘油等,会影响吸附效果。

相关搜索:重组肠激酶(无标签)rEK重组肠激酶EnterokinaseEnterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli
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