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本试剂盒可用于快速便捷分离组织/细胞线粒体，获得的线粒体纯度较高，且绝大部分都含有完整的内膜和外膜，可用于线粒体的生理功能等方面的研究，得到的线粒体也可被相应裂解液裂解得到线粒体蛋白，从而用于后续SDS-PAGE、Western、双向电泳及免疫共沉淀等分析。

• 线粒体的抽提
  
  • 样本处理
    
    • 组织匀浆：称取100～200mg新鲜组织，预冷的PBS或生理盐水冲洗干净，滤纸吸干，用剪刀剪成非常小的碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1～2.5mL冰预冷的试剂A，混匀，孵育8～10min，匀浆10～30下左右，也可采用超声方法破膜。
      
    • 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800g，4℃离心5～10min收集细胞。计数，每次提取需要1～5×10⁷个细胞，加入1～2.5mL预冷的试剂A，重悬细胞，混匀，冰上孵育10～15min，可以采用超声或匀浆器方法破膜。
      注：观察细胞膜破碎情况，可取少量细胞液，与台盼蓝染色液按照1:1比例混合后，镜检。当大多数（≥80%）细胞为蓝色，可进行下面实验。
  • 将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000g离心10min。
    注：细胞核、大的膜碎片、未裂解细胞等沉淀在管底。
    
  • 收集上清液并转移到新的离心管。4℃，1000g再次离心5min。弃沉淀。
    
  • 将上清液转移到新的离心管。4℃，12000g离心10min，小心去除上清，沉淀即为分离得到的细胞线粒体。
    注：离心后的上清含胞浆成分，尽量除去上清。
• 线粒体蛋白的抽提
  
  • 向每毫升预冷试剂B加入10μL试剂C混匀。冰上保存数分钟待用。
    
  • 按每10μL线粒体压积中，加入100μL上述配制好的试剂B/C溶液。
    
  • 置于4℃ 15～30min，间断涡旋振荡。
    
  • 10000rpm，4℃离心15min，取上清，即为线粒体全蛋白提取物，进行蛋白定量。
    
  • 分装保存于-70℃，避免反复冻融。