Bradford蛋白浓度测定试剂盒

产品货号：

SY0299

中文名称：

Bradford蛋白浓度测定试剂盒

英文名称：

Bradford Protein Quantification Kit

产品规格：

500T|2500T

发货周期：

1～3天

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Bradford蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一。它是根据Bradford染液（考马斯亮蓝G-250染料）与蛋白结合，使染料的最大吸收峰从A456变为A595，且测定的吸光值与蛋白浓度成正比关系的原理设计的。本法通过吸光值，推算蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高，比Lowry法大约高四倍，最低蛋白检测量可达1μg。测定速度快、简单，仅需一种试剂即可，且不受大多数样品中化学试剂的影响。

组分	500T	2500T
Bradford蛋白染色液	125mL	5×125mL
蛋白标准品(BSA,2mg/mL)	5×1mL	5×2mL

保存：染色液4℃保存，蛋白标准品常温或4℃保存，有效期一年。

注意事项

Bradford染色液使用前，应充分混匀。同时，酶标仪需预热20min。
Bradford染色液需恢复到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。另，使用前需颠倒几次以充分混匀。
由于Bradford染液的颜色反应并不是同递增的蛋白浓度呈线性关系，因此每次试验都必须建立标准曲线。另外，为了得到更精确的结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔。
Bradford法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好，比如对还原剂DTT的兼容性高达5mM。但会受到略高浓度的去垢剂影响，如，SDS需低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20/60/80低于0.015%等。对于含去垢剂的样品，建议使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(货号：SY0298)。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本制品仅作科研用途！

一、配制标准品
标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。
表一：BSA标准品体系配制（微孔板检测，线性范围100～1500μg/mL）

Vial	稀释液体积(μL)	2mg/mL BSA体积(μL)	BSA终浓度(μg/mL)
A	0	100	2000
B	25	75	1500
C	50	50	1000
D	125	75	750
E	150	50	500
F	350	50	250
G	375	25	125
H	395	5	25
I	400	0	0=Blank

二、检测方法

标准比色皿检测（线性范围：100～1500μg/mL）
- 各取20μL不同浓度标准品和待测样品加入到反应管中；
- 加入1mL Bradford染色液，混匀。室温孵育10min。
  注：样本室温孵育时间不可超过1h；
- 分光光度计上测定595nm处的吸光度，用装满水的比色皿对仪器校零。之后测定所有样本浓度。
- 根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度μg/mL；Y-最终的OD595nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
标准微孔板检测（线性范围：100～1500μg/mL）
- 各取5μL各浓度标准品和待测样品加入到微孔板中；
- 每孔加入250μL Bradford染色液，振荡30s充分混匀。盖上微孔板，室温孵育10min。
  注：样本室温孵育时间不可超过1h；
- 酶标仪上测定595nm处的吸光度。或者其他575～615nm波长范围内的吸光度，但是相对于595nm，吸光度会存在0～10%的损失。
- 根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度μg/mL；Y-最终的OD595nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
  注：
  - 由于酶标板的光径比比色皿短，经酶标板检测得到的OD595nm会低于比色皿检测所得，因此可能降低本法的检测下限。要得到更高的OD595nm，可使用7～10μL标准品/待检样本，和250μL Bradford染色液来进行检测。
  - 如果使用与酶标仪相关的曲线拟合算法（curve fitting algorithm），那么四参数或者最佳拟合曲线可能得到更为精确的结果，并不是单纯的线性拟合。若是手动标记各点浓度，点-点曲线出来的结果精确于线性拟合。若对结果准确性的要求不是非常严格，可使用线性拟合分析数据。

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