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本试剂盒适用于蛋白质的Tris-甘氨酸电泳体系，所制备的PAGE凝胶为免染胶，蛋白条带紫外曝光即可成像，无需染胶。本试剂盒采用上层胶和下层胶的预混配方，只需加入改良型促凝剂即可凝胶，灌入下层胶后，无需等待凝胶，直接灌入上层胶即可，简便快捷。所配的上层胶带有颜色(红色、蓝色或绿色)，点样孔清晰易辨，方便点样。三种颜色设计，可用于区分含不同样品的凝胶。本试剂盒灌制的凝胶也可用于非变性PAGE凝胶电泳。本试剂盒配套提供改良型促凝剂，其具有更好的稳定性和催化效能，配胶过程中无需额外添加TEMED。

• 紫外成像：无需染胶，蛋白条带可直接紫外曝光成像；
  
• 一步法灌胶：灌制下层胶后直接注入上层胶，无需液封；
  
• 操作简单快速：制胶无需计算所需溶液量，无需稀释；
  
• 彩色上层胶：可制备红蓝绿三种颜色的上层胶，为点样和区分不同凝胶提供便利；
  
• 避免异味：无需使用TEMED，避免恶臭气味；
  
• 条带清晰：尤其小分子蛋白质条带比在传统凝胶中更清晰。

本试剂盒提供的全套免染PAGE凝胶制备的试剂足够125块0.75mm凝胶，或90块1.00mm凝胶，或60块1.50mm凝胶的配制。

• 本制品制备出的凝胶其上层胶对样品没有浓缩效应，与预制胶类似，但与传统PAGE胶相比，对蛋白条带分离效果更好，小分子量蛋白(比如10kDa)也可以清晰地分离开，且蛋白条带更窄更锐利；
  
• 不同浓度试剂盒各组分请勿混用，否则会影响制胶及电泳效果；
  
• 改良型促凝剂的使用量仅作参考，实际用量可根据个人实验习惯和经验调整。加入较多量的促凝剂可加速凝胶，反之亦然；
  
• 凝胶速度与温度有显著的正相关性。同等条件下，温度越高，凝胶速度越快，室温过高时建议适当减小改良型促凝剂的用量；相反，如果室温较低，可适当延长凝胶时间；
  
• 本制品已加入适量TEMED的替代品，如需进一步加速凝胶，临配胶前可按需补充适量TEMED；
  
• 在配胶之前，使胶溶液及缓冲液平衡到室温(如室温放置几分钟)，可有效避免凝胶中气泡的形成；
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液，各2.0/2.7/4.0mL，混匀。
  
• 取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液，各0.5/0.75/1.0mL，混匀。
  
  由于染料的特殊理化性质，使用前请摇匀。
• 向步骤1的混合溶液中加入40/60/80μL的改良型促凝剂，轻轻混匀，将混匀后的溶液注入制胶玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5cm即可。
  
  • 此溶液为过量，请勿全部注入。
    
  • 加入改良型促凝剂后，需轻柔混匀，防止过多氧气混入胶溶液，抑制凝胶聚合。
• 向步骤2的混合溶液中加入10/15/20μL的改良型促凝剂，轻轻混匀，无需等待下层胶凝固，即可将混匀后的溶液轻缓注入制胶玻璃板中，插入梳齿。
  
  • 灌注上层胶溶液一定要轻缓，避免将上层胶溶液冲入下层胶，上层胶溶液注入后，轻轻振动制胶架，即可使上下层胶分界线平齐。
    
  • 加入改良型促凝剂后，需轻柔混匀，防止过多氧气混入胶溶液，抑制凝胶聚合。
• 待胶凝固后(约15min)，拔去梳齿即可用于电泳。
  推荐电泳条件为：150 V，约60min (或200 V，约45min)。
  
  • 请尽量使用新鲜配制的电泳缓冲液。
    
  • 胶凝固后上下层胶分界线平整度略弱于传统方法配的胶，但对后续电泳没有影响。
• 电泳结束后，即可将凝胶从玻璃板中取出，放入成像仪紫外（波长302nm）曝光成像，或在紫外切胶台上直接观察。
  
  • 紫外激发荧光基团需一定时间，一般经1～5min，凝胶上即可呈现清晰的蛋白条带。
    
  • 观察Western Blot转印后膜上蛋白条带，必须在电泳后，将凝胶经紫外激发出现清晰条带后，再进行转膜操作。若直接转膜再用紫外激发，荧光信号会很弱或无信号。
    
  • 如无紫外成像需求，也可当作常规PAGE胶直接进行考马斯亮蓝染色或Western Blot转膜等后续操作。