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本制品是基于Bradford法用于蛋白浓度测定的试剂盒，通过优化，能兼容一系列常见去垢剂和一定浓度的还原剂，并且检测数据有很好的线性关系。本试剂盒的性能不仅优于常规的Bradford法，和BCA法相比也更加快速便捷。本试剂盒兼容蛋白提取的多种裂解液，包括Western及IP细胞裂解液、RIPA裂解液、NP-40裂解液、SDS裂解液等。

• 检测速度快：10～20个样品只需不足10分钟即可完成。
  
• 灵敏度高：检测下限可达25μg/mL(测定范围在50～1000μg/mL内有较好的线性关系)，最小检测蛋白量可达0.5μg。
  
• 兼容性好：该试剂盒测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M，DTT的浓度可高达5mM。同时，此方法测定蛋白浓度可以兼容受高浓度的去垢剂影响，可以适用于膜蛋白样品的浓度测定。蛋白样品中SDS浓度低于1%，Triton X-100浓度低于1%，Tween 20、60、80浓度低于1%，NP-40浓度低于1%都可以定量。

考马斯亮蓝G-250在酸性条件下和蛋白质结合，使得染料最大吸收峰从465nm变为595nm，在一定的线性范围内，反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。

蛋白研究中许多蛋白样品都是含有去垢剂，因此常规Bradford法的使用受到了很大的限制，通常只能使用可以兼容去垢剂但检测比较耗时的BCA法。但BCA法无法兼容还原剂。当蛋白样品中同时含有一定浓度的去垢剂和还原剂时，常规的Bradford法和BCA法都无法使用，而本试剂盒仍然是可以检测的。

• 蛋白标准请全部溶解混匀后再使用。
  
• 需可检测560～610nm之间波长的酶标仪一台，最佳检测波长为595nm。并需96孔微孔板。

• G-250染液在使用前应平衡温度至常温并温和颠倒混匀。
  
• 1mg/mL蛋白标准品配制：常温完全溶解蛋白标准品，取20μL 5mg/mL BSA蛋白标准溶液，加入80μL PBS溶液，使其终浓度为1mg/mL。
  
• 按照下表配制BSA标准测定溶液：
  

  编号	0	1	2	3	4	5	6	7	8
  BSA标准溶液(μL)	0	0.5	1.5	2.5	5.0	7.5	10	15	20
  PBS溶液(μL)	20	19.5	18.5	17.5	15	12.5	10	5	0
  BSA终浓度(μg/mL)	0	25	75	125	250	350	500	750	1000

• 取10μL不同浓度蛋白标准加到96孔微孔板的蛋白标准孔中。
  
• 将适当体积的待测样品加入到微孔板中，如果样品不足10μL，用PBS补足到10μL。
  
• 向微孔板中加入300μL G-250染色液，混匀，常温放置3～5min。
  
• 用酶标仪测定A₅₉₅波长的吸光度，以不含BSA的样品的光吸收值作为空白对照。可以立即测定吸光度，也可以在30分钟内测定，30分钟内检测数据无显著变化。对于不含去垢剂和含有某些去垢剂的情况，在2小时内检测数据无显著变化；对于含有某些特定去垢剂的情况，在2小时内检测数据会有一定的变化，但仍然会呈现较好的线性关系。
  
• 以A₅₉₅为纵坐标，BSA含量为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。
  • 如使用分光光度计测定，可根据实际需要扩大溶液体积，保证蛋白标准溶液和蛋白样品与G-250染液的体积比为10∶300，例如，如果需要1.5mL，可取蛋白样品50μL，G-250染液试剂1.5mL。