产品货号：
RFT462
中文名称：
Blue/Clear非变性凝胶电泳试剂盒(U型板4-16%预制胶)
英文名称：
Blue/Clear Native PAGE Electrophoresis Kit
产品规格：
10T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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Blue/Clear Native PAGE（BN/CN-PAGE）是一种从生物样品（质膜，胞浆等）中非变性分离蛋白质复合物的电泳技术。其原理是用温和去污剂(如DDM，digitonin)将蛋白复合体从细胞膜中以近似天然的状态分离出来，Blue Native PAGE （BN-PAGE）是用考马斯亮蓝G-250代替SDS与蛋白结合而使其带负电荷，根据蛋白分子量不同在PAGE胶中得到分离；Clear Native PAGE（CN-PAGE）是电泳缓冲液中不加入任何染料，电泳中始终保持蛋白的天然电荷和活性状态，然而，其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外，BN-PAGE由于考马斯亮蓝G-250存在，使蛋白都覆盖上负电荷，可以分离碱性蛋白（pI＞7）；而CN-PAGE只适合于酸性蛋白（pI＜7）的分离。
本制品包括BN/CN-PAGE电泳的所有成分，方便使用。可以用于分离分子量在60kD～1000kD的蛋白复合体，样品可以来于胞浆、细胞总裂解液、细胞膜、线粒体膜和叶绿体膜等。电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交、SDS-PAGE电泳、蛋白纯化、蛋白活性检测等分析实验，也可直接用于电洗脱制备蛋白。
| 组分 | 规格 | 保存 |
| 4～16% TruePAGE Native BN/CN预制胶 | 10板 | 4℃ |
| 10×BN/CN PAGE电泳缓冲液粉剂 | 500mL | RT |
| 4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液 | 1mL | -20℃ |
| 2% G-250染料（电泳用） | 20mL | RT |
| 5% G-250染料（上样用） | 1mL | 4℃ |
保存：按标签指示条件保存，有效期一年。
一、样品制备
本试剂盒不含样品制备的相关试剂，根据样品种类选择不同提取方法。植物类囊体BN样品制备可以选择植物类囊体膜提取试剂盒（RFT465）；动物总蛋白BN样品制备可以选择动物胞浆活性蛋白提取试剂盒(RFT464)；动物膜蛋白BN样品制备可以选择动物膜蛋白提取试剂盒（RFT466,RFT467）；动物线粒体BN样品制备可以选择动物线粒体提取试剂盒（RFT468和RFT469)。
二、电泳
- 拆开预制胶包装，将预制胶安装在合适的电泳槽中。
- 伯乐Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向（下图）。
- 六一其他系列，君意东方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等电泳槽可以直接使用预制胶。
- 不兼容Thermol系列电泳槽。
- 伯乐Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向（下图）。
- 准备电泳缓冲液：
将10×BN/CN PAGE电泳缓冲液（干粉）溶于500mL灭菌水中，彻底溶解，测定pH应为7.0左右，不要调节pH。用前稀释10倍即配成1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。- CN-PAGE电泳：阳极缓冲液和阴极缓冲液均直接使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液进行电泳。
- BN-PAGE电泳：阳极缓冲液使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液，阴极缓冲液按照下表配制：
1×蓝色阴极缓冲液 150mL 10×BN/CN PAGE电泳缓冲液 15mL 2% G-250染料（电泳用） 1.5mL 超纯水 定容至150mL
- CN-PAGE电泳：阳极缓冲液和阴极缓冲液均直接使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液进行电泳。
- 准备样品：
- CN-PAGE电泳：
总体积 10μL 蛋白样品 x μl 4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液 2.5μL 超纯水 补至10μL 不要加热 - BN-PAGE电泳：
- 植物类囊体膜蛋白电泳：
总体积 10μL 含去垢剂样品* 植物类囊体膜蛋白样品（2%DDM增溶） x μL 4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液 2.5μL 5% G-250染料（蛋白上样） 1μL 超纯水 补至10μL 不要加热 - 植物类囊体膜蛋白电泳中，含去垢剂样品中染料加入按照以下原则：植物类囊体样品中G250终浓度为去垢剂终浓度的1/4。例如样品中DDM（n-Dodecyl β-D-maltoside，β-DM，n-十二烷基-β-D-麦芽糖苷）终浓度为2%，则需要G-250终浓度为0.5%。10μL蛋白样品中需要加5% G-250染料1μL。
- 动物线粒体BN样品电泳：
总体积 10μL 含去垢剂样品* 动物线粒体BN样品（1%DDM增溶） x μl 4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液 2.5μL 5% G-250染料（蛋白上样） 0.25μL 超纯水 补至10μL 不要加热 - 动物线粒体BN样品电泳中，含去垢剂样品中染料加入按照以下原则：动物线粒体BN样品中G250终浓度为去垢剂终浓度的1/8。例如样品中DDM终浓度为1%，则需要G-250终浓度为0.125%。10μL蛋白样品中需要加5% G-250染料0.25μL。
- 植物类囊体膜蛋白电泳：
- CN-PAGE电泳：
- 电泳过程：
- CN-PAGE电泳：
电泳内外槽均使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。在电泳槽的内槽内加入1×BN/CN PAGE电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻拨出预制胶梳子，用1mL吸头冲洗加样孔3次，随后在电泳槽外槽加入适量的1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。CN-PAGE电泳 恒电压 起始电流 结束电流 电泳时间 120V 10-15mA/板胶 4-10mA/板胶 50+min 冰浴电泳 - BN-PAGE电泳：
BN-PAGE电泳外槽使用1×BN/CN电泳缓冲液；内槽开始电泳使用的是1×蓝色阴极缓冲液，冰浴电泳，等待电泳指示前沿到达凝胶1/3处时，将电泳缓冲液更换为1×BN/CN电泳缓冲液，继续后续电泳，因为过多染料会影响蛋白在凝胶中的迁移以及蛋白后续的转膜实验。
指示前沿至凝胶顶部三分之二处，更换内槽缓冲液为1×BN/CN电泳缓冲液。恒电压 起始电流 电泳时间 缓冲液 120 V 8-15 mA 20～25min 1×蓝色阴极缓冲液 冰浴电泳 恒电压 继续电泳时间 结束电流 缓冲液 120 V 45min + 3-5 mA 1×BN/CN电泳缓冲液 冰浴电泳 
- CN-PAGE电泳：
三、转膜
BN-PAGE转膜必须用PVDF膜，不能用NC膜，因为NC膜与G-250结合非常紧密，不易去除。转膜后PVDF膜上的蓝色染料可以用无水甲醇漂洗去除。转膜缓冲液推荐使用10×BN转膜缓冲液粉剂(货号：RFT461)。
四、染色
- 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量QuickLan蛋白染色液或常规考马斯亮蓝染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），条带1～2分钟即可见。
- 摇床常温摇动10～15分钟至条带清晰可见。
- 加入适量蒸馏水脱色，期间更换1～2次蒸馏水，摇床常温摇动10～15分钟至背景干净。
- 观察保存结果。
五、实验示例
BN-PAGE 3～12% Precast Gel
稳压120V 1.5h 1×BN/CN电泳缓冲液冰浴电泳
BN-PAGE 4～16% Precast Gel
恒压120V 2h 1×BN/CN电泳缓冲液冰浴电泳
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