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本试剂盒包含非变性电泳所需的全部试剂，用户只需自备蛋白电泳设备。试剂盒配套有预制胶，不需要自己制备凝胶，方便使用。另外，试剂盒提供蛋白上样缓冲液，电泳缓冲液以及染色液，可以方便完成蛋白样品从上样到最后染色的全部过程。试剂盒配套的预制胶为梯度凝胶，浓度为4～15%，可以有效分离30～1000kD蛋白。

由于本系统采用非连续Laemmli凝胶系统（Tris-Glycine系统），电泳凝胶系统pH在8.3-8.8，因此要求待分离的蛋白等电点pI≤8.0（酸性蛋白），这样蛋白在凝胶系统内带负电荷，pI越低于8.0，带更多的负电荷，在凝胶电泳中才能正常向正极泳动。如果待分离的蛋白等电点pI＞8.0（碱性蛋白），请选择碱性电泳凝胶系统分离（碱性蛋白Native-PAGE胶制备及电泳试剂盒，货号：RFT220）。

• 样品制备：
  本试剂盒不含样品制备的相关试剂，请根据参考文献自行制备非变性蛋白样品。
  
  • 非变性样品制备中注意不用使用任何变性剂如SDS，LDS以及还原型如DTT，BME，TCEP等，以防止蛋白变性。
    
  • 非变性样品的电泳对盐离子浓度高度敏感，样品电泳时尽量把盐离子浓度控制在100mM以内，过高的盐离子浓度导致电泳拖尾，条带不能有效分离。
• 电泳：
  
  • 拆开预制胶包装，将预制胶安装在合适的电泳槽中。
    
    • 伯乐Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向（下图）。
      
      
    • 六一其他系列，君意东方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等电泳槽可以直接使用预制胶。
      
    • 不兼容Thermol系列电泳槽。
    
    
  • 准备电泳缓冲液：将5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（粉末型）溶于1L超纯水中，彻底溶解，测定pH应为8.3～8.5左右，不要调节pH。用前稀释5倍即配成1×即用型Tris-甘氨酸电泳缓冲液。
    
  • 准备上样样品：
    

    成分	用量
    蛋白样品	x μL
    5×非变性非还原蛋白上样缓冲液	2μL
    超纯水	至10μL
    	不要加热

  • 电泳过程；
    在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，用1mL吸头冲洗加样孔3次；随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。上样，电泳。
    

    Native-PAGE电泳
    恒电压	起始电流	结束电流	电泳时间
    150V	40-30 mA/板胶	10-15 mA/板胶	60+min
    注：冰浴电泳（可选）

• 染色：
  
  • 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量QuickLan蛋白染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），摇床常温摇动，条带5～10分钟即可见（蛋白含量高于1μg条带）。
    
  • 摇床常温继续摇动15～30分钟至条带清晰可见。
    
  • 加入适量蒸馏水脱色，期间更换1～2次蒸馏水，摇床常温摇动10～15分钟至背景干净。
    
  • 观察保存结果。