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本制品由9种多肽和蛋白质组成，分子量范围3～40kD，为预染型蛋白Marker，可以直接观察蛋白电泳及清晰判断Western Blotting的转膜效果。


超低分子量蛋白Marker(3～40kD，彩虹预染)分子量大小分别为3、4.2、6.5、10、15、20、25、30、40kD，其中10kD为绿色，40kD为红色，蛋白大小已在18% Tricine-SDS-PAGE中用非预染蛋白Marker标定过。



第一次收到该产品，常温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底。


一、制胶

• 配制分离胶
  
  • 按照表一将不同体积的双蒸水、40% PAA(19:1)、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
    
  • 加入10%APS和TEMED，立即混匀5～10秒，以使溶液充分混匀。
    
  • 在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1cm的无水乙醇，使凝胶表面保持平整。
    
  • 静置15～30分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
    表一：一块1mm mini胶用量
    

    成分	分离胶	浓缩胶
    	18％T,5%C/5mL	5％T,3.3%C/2mL
    40% PAA（19:1）	2.25mL	/
    40% PAA (29:1)	/	0.25mL
    4×凝胶缓冲液	1.25mL	0.5mL
    乙二醇（电泳级）	1.5mL	/
    ddH2O	/	1.25mL
    10％APS	50μL	20μL
    TEMED	5μL	2μL

• 配制浓缩胶
  去除覆盖在分离胶上的乙醇层，用滤纸将残留乙醇吸去。
  
  • 按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(29:1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
    
  • 加入10%过硫酸铵和TEMED，立即混匀5～10秒，以使溶液充分混匀。
    
  • 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
    
  • 静置30～60分钟装待凝胶聚合。

二、电泳

• 取Marker样品，充分混匀后备用。不要加热处理。
  
• 电泳前，将10×阳极缓冲液(货号：RFT214)和10×阴极缓冲液(货号：RFT227)用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的外槽加入1×阳极缓冲液，内槽加入1×阴极缓冲液，轻柔拔出梳子，将Marker或蛋白样品（已经过2×Tricine上样缓冲液处理）加入点样孔，参考下表进行电泳，至每条带都清晰可见时停止电泳。整个电泳过程大约需要2～3个小时。
  表二：多肽电泳条件
  

  恒电压	150V
  起始电流	60～75mA/板胶
  结束电流	15～25mA/板胶
  电泳时间	2.5～3小时

三、染色
根据常规实验步骤，用配方6和7（附表1）进行染色和观察。如果使用配方6进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的考马斯亮蓝快速染色液(货号：RFT054)，该产品除具有染色快，无毒，灵敏性高等特点外，还能对小肽在染色中起到固定作用，不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离，是常规染色液的理想替代品。
注：预染蛋白Marker由于嵌合了染料，在不同的凝胶系统中迁移率会有不同，因此只能用来粗略估计目的蛋白的大小。如要精确确定蛋白的大小，请在同一凝胶系统中用非预染蛋白Marker来标定预染蛋白Marker的分子量。


附表1：小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制

配方1：40%PAA(29:1)(配制浓缩胶) 货号：RFT068 丙稀酰胺：38.67g； 甲叉双丙稀酰胺：1.33g； 用ddH2O溶解后定容至100mL，过滤后使用。 贮存：4℃	配方2：40%PAA(19:1)(配制分离胶) 货号：AC1914 丙稀酰胺：38g； 甲叉双丙稀酰胺：2g； 用ddH2O溶解后定容至100mL，过滤后使用。 贮存：4℃	配方3：4×凝胶缓冲液(配制凝胶用) [3M Tris，0.4% SDS，pH8.45] 货号：RFT231 Tris碱：36.3g； SDS：0.4g(或10%SDS：4mL)； 用HCl调pH值至8.45； 用ddH2O定容至100mL。 贮存：4℃
配方4：10×阳极缓冲液(下槽缓冲液) [2M Tris，pH8.9] 货号：RFT214 Tris碱：121.1g； 用HCl调pH值至8.9； 用ddH2O定容至500mL 贮存：4℃ 注：使用前稀释成1×阳极缓冲液使用。	配方5：10×阴极缓冲液(上槽缓冲液) [1M Tris，1M Tricine，1% SDS，pH8.3] 货号：RFT227 Tris碱：121.14g； Tricine：179.2g； SDS：10g； 用ddH2O溶解，定容至1000mL(不用调pH)。 贮存：4℃ 注：使用前稀释成1×阴极缓冲液使用	配方6：染色液 货号：RFT551 冰醋酸：100mL； 考马斯亮蓝G-250：0.25g；
配方7：脱色液 货号：RFT552 冰醋酸：100mL； 水：900mL	配方8：2×Tricine蛋白样品上样缓冲液(10mL) 货号：RFT154 1M Tris-HCl(pH6.8)：1mL； 甘油：2.4mL(3g)； SDS：0.8g； DTT：0.31g(或β-巯基乙醇：400μL)； 考马斯亮蓝G-250：2mg； 用灭菌水定容至10mL； 混匀分装-20℃贮存备用

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