产品货号：
RFT076
中文名称：
SDS-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒
英文名称：
SDS-PAGE gel preparation and electrophoresis Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒包含凝胶制备以及蛋白电泳所需的全部试剂，可配制至少50块常规大小的PAGE胶。
表三：SDS-PAGE分离胶配方表
表四：SDS-PAGE浓缩胶(4%)配方表
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| 组分 | 规格 | 保存条件 |
| 40%PAA(29:1) | 100mL | 4℃ |
| 4×Tris/SDS分离胶缓冲液pH8.8 | 100mL | 4℃ |
| 4×Tris/SDS浓缩胶缓冲液pH6.8 | 50mL | 4℃ |
| APS（干粉） | 0.5g | RT |
| TEMED | 0.5mL | 4℃，避光 |
| 5×MonoColor蛋白上样缓冲液（含还原剂） | 1mL | -20℃ |
| 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（干粉） | 1L | RT |
- 准备工作：
- 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度。
表一：不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围SDS-PAGE分离胶浓度 最佳分离范围 6% 50～150kD 8% 30～90kD 10% 20～80kD 12% 12～60kD 15% 10～40kD - 10% APS的配制-5mL：
将0.5 gAPS干粉溶于5mL灭菌水中，彻底溶解后分装，1mL/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10% APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的10%APS。
- 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度。
- 配制分离胶
- 参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
- 按照表二将不同体积的成分在小烧杯中混合；加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
表二：SDS-PAGE凝胶配方表成分 浓缩胶 分离胶 4% 8% 10% 12% 15% 40% PAA(29:1) 0.2mL 1mL 1.25mL 1.5mL 1.9mL 4×浓缩胶缓冲液 0.5mL - - - - 4×分离胶缓冲液 - 1.25mL 1.25mL 1.25mL 1.25mL 超纯水 1.3mL 2.7mL 2.5mL 2.2mL 1.9mL TEMED 2μL 5μL 5μL 5μL 5μL 10% APS 20μL 50μL 50μL 50μL 50μL 总体积 2mL 5mL 5mL 5mL 5mL - 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于8×10cm凝胶，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可)，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1～5cm的水层，使凝胶表面保持平整。
- 静置10～20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
- 参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
- 浓缩胶制备
- 去除覆盖在分离胶上的水层。
- 按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合；加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
- 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
- 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
- 静置20～30分钟，等待浓缩胶聚合。
- 去除覆盖在分离胶上的水层。
- 电泳
- 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液的配制(5×TGS)：
将一包5×TGS干粉全部倒入1L烧杯中，加入约900mL水彻底溶解，用水定容至1L，即配成5×TGS缓冲液(此溶液不用调节pH值)。用前再稀释5倍即配成1×TGS电泳缓冲液。 - 样品处理：融化-混合-变性-上样
- 将5×MonoColor蛋白上样缓冲液常温融化后混匀。
- 将上样缓冲液与蛋白样品按照1:4的比例混匀。
- 将蛋白样品置于95℃加热5分钟使蛋白样品充分变性。
- 样品凉至室温后，快甩离心收集到管底，上样电泳。
- 将5×MonoColor蛋白上样缓冲液常温融化后混匀。
- 电泳参数设置
恒电压 150V 起始电流 35-40mA 终止电流 10-15mA 电泳时间 40～50min - 染色或进行下游实验。
- 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液的配制(5×TGS)：
表三：SDS-PAGE分离胶配方表
| 浓度 | 成分 | 不同凝胶体积对应各组份的取样量(ml) | |||
| 5mL | 10mL | 15mL | 20mL | ||
| 8％胶 | H2O | 2.7 | 5.4 | 8.1 | 10.8 |
| 4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8 | 1.25 | 2.5 | 3.75 | 5 | |
| 40％ PAA(29:1) | 1 | 2 | 3 | 4 | |
| TEMED | 0.005 | 0.01 | 0.015 | 0.02 | |
| 10％ APS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | |
| 10％胶 | H2O | 2.45 | 4.9 | 7.35 | 9.8 |
| 4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8 | 1.25 | 2.5 | 3.75 | 5 | |
| 40％ PAA(29:1) | 1.25 | 2.5 | 3.75 | 5 | |
| TEMED | 0.005 | 0.01 | 0.015 | 0.02 | |
| 10％ APS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | |
| 12％胶 | H2O | 2.2 | 4.4 | 6.6 | 8.8 |
| 4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8 | 1.25 | 2.5 | 3.75 | 5 | |
| 40％ PAA(29:1) | 1.5 | 3 | 4.5 | 6 | |
| TEMED | 0.005 | 0.01 | 0.015 | 0.02 | |
| 10％ APS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | |
| 15％胶 | H2O | 1.825 | 3.65 | 5.475 | 7.3 |
| 4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8 | 1.25 | 2.5 | 3.75 | 5 | |
| 40％ PAA(29:1) | 1.875 | 3.75 | 5.625 | 7.5 | |
| TEMED | 0.005 | 0.01 | 0.015 | 0.02 | |
| 10％ APS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | |
表四：SDS-PAGE浓缩胶(4%)配方表
| 成分 | 不同凝胶体积对应各组份的取样量(ml) | |||
| 2mL | 4mL | 5mL | 10mL | |
| H2O | 1.17 | 2.34 | 2.925 | 5.85 |
| 4×Tris/SDS浓缩胶buffer pH6.8 | 0.63 | 1.26 | 1.575 | 3.15 |
| 40％ PAA(29:1) | 0.2 | 0.4 | 0.5 | 1 |
| TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.005 | 0.01 |
| 10％ APS | 0.02 | 0.04 | 0.05 | 0.1 |
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