产品目录

本试剂盒是根据考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）法研制而成，其原理是考马斯亮蓝G-250在酸性条件下和蛋白质结合，使得染料最大吸收峰从465nm变为595nm，在一定的线性范围内，反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。

• 灵敏度高，检测浓度下限可达25μg/mL （测定浓度范围在50～1000μg/mL内有较好的线性关系），最小检测蛋白量可达0.5μg，待测样品体积为1～20μL。
  
• Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M，DTT的浓度可高达5mM。然而，此方法测定蛋白浓度受高浓度的去垢剂影响，故不能适用膜蛋白样品的浓度测定。需确保测定样品中SDS浓度低于0.01%，Triton X-100浓度低于0.05%，Tween 20浓度低于0.015%。测定含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度试剂盒。

• 微孔板测定程序：（工作范围25～1000μg/mL）
  
  • G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀。
    
  • 蛋白标准品配制：常温完全融解BSA标准溶液(5mg/mL)，取20μL 5mg/mL的BSA蛋白标准溶液加入80μL的PBS溶液，稀释到100μL，使其终浓度为1mg/mL。
    
  • 按照下表配制BSA标准测定溶液：
    

    编号	0	1	2	3	4	5	6	7	8
    	1mg/mL BSA标准溶液(μL)							5mg/mL BSA标准溶液(μL)
    BSA标准溶液(μL)	0	0.5	2.5	5	10	15	20	6	8
    PBS溶液(μL)	20	19.5	17.5	15	10	5	0	14	12
    BSA终浓度(μg/mL)	0	25	125	250	500	750	1000	1500	2000
    总体积	20μL

    
    
  • 将适当体积的待测样品加入到微孔板中，并用PBS补足到20μL；
    
  • 向微孔板中加入200μL G-250染色液，混匀，室温放置30分钟；
    
  • 测定595nm处的吸光值，并记录读数；以不含BSA的样品的光吸收值作为空白对照。
    
  • 以BSA含量为纵坐标A₅₉₅读数为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。
• 试管测定程序：（工作范围25～1000μg/mL）
  
  • G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀；
    
  • 1mg/mL蛋白标准品配制：室温完全溶解蛋白标准品，120μL 5mg/mL BSA蛋白标准溶液，加入480μL PBS溶液，使其终浓度为1.0mg/mL。
    
  • 按照下表配制BSA标准测定溶液：
    

    编号	0	1	2	3	4	5	6	7	8
    	1mg/mL BSA标准溶液(μL)							5mg/mL BSA标准溶液(μL)
    BSA标准溶液(μL)	0	5	25	50	100	150	200	60	80
    PBS溶液(μL)	200	195	175	150	100	50	0	140	120
    BSA终浓度(μg/mL)	0	25	125	250	500	750	1000	1500	2000
    总体积	200μL

    
    
  • 将适当体积的待测样品加入到试管中，并用PBS补足到200μL；
    
  • 向试管中加入3mL G-250染色液，混匀，室温放置3～5分钟；
    
  • 测定595nm处的吸光值，并记录读数；以不含BSA的样品的光吸收值作为空白对照。
    
  • 以BSA含量为纵坐标A₅₉₅读数为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。