
产品货号:
RFT058
中文名称:
Bradford蛋白浓度测定试剂盒
英文名称:
Bradford Protein Assay Kit
产品规格:
1000次
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒是根据考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)法研制而成,其原理是考马斯亮蓝G-250在酸性条件下和蛋白质结合,使得染料最大吸收峰从465nm变为595nm,在一定的线性范围内,反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比,测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。

- 灵敏度高,检测浓度下限可达25μg/mL (测定浓度范围在50~1000μg/mL内有较好的线性关系),最小检测蛋白量可达0.5μg,待测样品体积为1~20μL。
- Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M,DTT的浓度可高达5mM。然而,此方法测定蛋白浓度受高浓度的去垢剂影响,故不能适用膜蛋白样品的浓度测定。需确保测定样品中SDS浓度低于0.01%,Triton X-100浓度低于0.05%,Tween 20浓度低于0.015%。测定含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度试剂盒。

组分 | 规格 | 保存 |
考马斯亮蓝G-250染色液 | 200mL | 4℃ |
PBS溶液 | 10mL | |
BSA标准溶液(5mg/mL) | 2×1mL | -20℃ |
保存:按标签指示条件保存,有效期一年。

本试剂盒使用微孔板可以检测1000个样品,或使用试管可以检测60个样品。

- 微孔板测定程序:(工作范围25~1000μg/mL)
- G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀。
- 蛋白标准品配制:常温完全融解BSA标准溶液(5mg/mL),取20μL 5mg/mL的BSA蛋白标准溶液加入80μL的PBS溶液,稀释到100μL,使其终浓度为1mg/mL。
- 按照下表配制BSA标准测定溶液:
编号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 1mg/mL BSA标准溶液(μL) 5mg/mL BSA标准溶液(μL) BSA标准溶液(μL) 0 0.5 2.5 5 10 15 20 6 8 PBS溶液(μL) 20 19.5 17.5 15 10 5 0 14 12 BSA终浓度(μg/mL) 0 25 125 250 500 750 1000 1500 2000 总体积 20μL - 将适当体积的待测样品加入到微孔板中,并用PBS补足到20μL;
- 向微孔板中加入200μL G-250染色液,混匀,室温放置30分钟;
- 测定595nm处的吸光值,并记录读数;以不含BSA的样品的光吸收值作为空白对照。
- 以BSA含量为纵坐标A595读数为横坐标,绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内,请稀释样品后重新测定。
- G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀。
- 试管测定程序:(工作范围25~1000μg/mL)
- G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀;
- 1mg/mL蛋白标准品配制:室温完全溶解蛋白标准品,120μL 5mg/mL BSA蛋白标准溶液,加入480μL PBS溶液,使其终浓度为1.0mg/mL。
- 按照下表配制BSA标准测定溶液:
编号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 1mg/mL BSA标准溶液(μL) 5mg/mL BSA标准溶液(μL) BSA标准溶液(μL) 0 5 25 50 100 150 200 60 80 PBS溶液(μL) 200 195 175 150 100 50 0 140 120 BSA终浓度(μg/mL) 0 25 125 250 500 750 1000 1500 2000 总体积 200μL - 将适当体积的待测样品加入到试管中,并用PBS补足到200μL;
- 向试管中加入3mL G-250染色液,混匀,室温放置3~5分钟;
- 测定595nm处的吸光值,并记录读数;以不含BSA的样品的光吸收值作为空白对照。
- 以BSA含量为纵坐标A595读数为横坐标,绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内,请稀释样品后重新测定。
- G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀;
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