产品货号：
QN1159
中文名称：
Western DAB法显色试剂盒(小鼠/兔IgG)
英文名称：
Western Blotting Mouse/Rabbit IgG DAB Chromogenic Reagent Kit
产品规格：
1盒
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
产品组成：
保存：-20℃，避光，有效期1年。
注意事项：
用法参考：
常规电泳转膜后：
相关搜索：Western DAB法显色试剂盒(小鼠/兔IgG)
本试剂盒主要用于Western Blotting的DAB显色，包含的二抗是HRP标记的抗小鼠/兔IgG，适用于一抗类型为小鼠/兔IgG的免疫显色。
SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。
产品组成：
| 组分 | 规格 | 说明 |
| 封闭试剂 | 30g | |
| 10倍浓缩抗体稀释液 | 50mL | |
| HRP标记的抗小鼠/兔IgG | 0.1mL | 效价1∶5000～10000 |
| 20×DAB浓缩显色液A | 5mL | |
| 20×DAB浓缩显色液B | 5mL |
保存：-20℃，避光，有效期1年。
注意事项：
- 请根据一抗来源选择不同货号的DAB法显色试剂盒。
- 若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和20倍DAB显色液B存放于2～8℃以方便使用。
- western blotting DAB显色法操作简单，但其敏感性与ECL发光发有一定的差距，一般只适用于丰度较高的蛋白。
- 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可延长抗体孵育时间。
- 如果完全没有条带，请检查前期蛋白处理及实验过程，如果确认无误，反复两次依旧无结果，请换用ECL发光法显色。
- TBS-T（10mM）配制方法：称取NaCl 8.5g、Tris 1.21g，用800mL的双蒸水溶解，用盐酸调pH到7.6，再加入0.5mL Tween－20，用双蒸水加至1L，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）
用法参考：
常规电泳转膜后：
- 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min，以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
- 按5g封闭试剂加100mL双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜，封闭液内，摇床震动，室温封闭30min。用TBS-T洗液(pH7.6)，室温漂洗3次每次5min。
- 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×。
- 10mL 10×抗体稀释液加入90mL双蒸水，混匀，可4℃保存三个月。
- 此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
- 10mL 10×抗体稀释液加入90mL双蒸水，混匀，可4℃保存三个月。
- 用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
- 用TBS-T洗液(pH7.6)，室温漂洗3次每次5min。
- 用稀释好的抗体稀释液稀释抗体。根据用量，按10mL抗体稀释液加入1～2μL HRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
- 用TBS-T洗液(pH7.6)，室温漂洗3次每次10min。
- 配制DAB显色：根据用量，取TBS-T 4mL，加入DAB显色液A、DAB显色液B各200μL，混匀，加在膜正面，室温下显色。在目标条带显出后，而且背景未出时，放入水中终止显色。
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