产品货号：
QN1155
中文名称：
Western化学发光法(ECL)检测试剂盒(小鼠/兔IgG)
英文名称：
ECL Western Blotting Detection Kit(Mouse/Rabbit IgG)
产品规格：
1盒
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
产品组成：
保存：-20℃，避光，有效期1年。
注意事项：
使用方法：
常规电泳转膜后：
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本试剂盒主要用于western blotting的化学发光显色，含有HRP标记抗小鼠/兔IgG二抗，适用于一抗类型为小鼠/兔IgG的化学发光检测。
SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带（抗原所在位置）。
产品组成：
| 组分 | 规格 | 说明 |
| 封闭试剂 | 30g | 可配制600mL |
| 10×抗体稀释液 | 50mL | |
| HRP标记抗小鼠/兔IgG | 100μL | 效价1∶5000～10000 |
| ECL发光液A | 25mL | 用前按需取A、B液1∶1混合成ECL发光液 |
| ECL发光液B | 25mL |
保存：-20℃，避光，有效期1年。
注意事项：
- 请根据一抗来源选择相应的化学发光检测试剂盒。
- 若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和ECL显色液存放于2～8℃以方便使用。
- 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可增加抗体浓度，可延长抗体孵育时间或加长感光时间。
- TBS-T缓冲液(10mM,pH7.6)配制方法：称取NaCl 8.5g、Tris 1.21g，用800mL的双蒸水溶解，用盐酸调pH到7.6，再加入0.5mL Tween－20，用双蒸水加至1000mL，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）
使用方法：
常规电泳转膜后：
- 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min，以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
- 按5g封闭试剂加100mL双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭30min。用TBS-T缓冲液(pH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次5min。
- 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×.
- 10mL 10×抗体稀释液加入90mL双蒸水，混匀，可4℃保存三个月。
- 此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
- 10mL 10×抗体稀释液加入90mL双蒸水，混匀，可4℃保存三个月。
- 用1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
- 用TBS-T缓冲液(pH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次5min。
- 用1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10mL抗体稀释液加入1～2μL HRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
- 用TBS-T缓冲液(pH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次10min。
- 根据用量，取ECL发光液A、B等量混匀，加在膜正面，暗室显色1-5分种。倾去显色液，小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色30秒到1分钟，取出胶片浸入显影液中，观察显色情况，再放入定影液中1分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短或者加长感光时间（从5秒到30分钟）以期达到理想结果。
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