Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

产品货号：

QN1086

中文名称：

Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

英文名称：

产品规格：

25T|50T|100T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

常规的Tris-SDS-PAGE电泳的只能分辨大分子蛋白，对于相对分子量小的，尤其是10kD以下的蛋白分辨率极低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分离分子量在1～10kD的蛋白及多肽，成为目前电泳法变性分离多肽的主要方法。本制品包括Tricine-SDS- PAGE凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量各种浓度的凝胶，方便、快捷，电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。

产品组成：

组分	25T	50T	100T	保存
49.5%T 3%C	15mL	30mL	60mL	2～8℃，避光
49.5%T 6%C	50mL	100mL	2×100mL	2～8℃，避光
凝胶缓冲液	70mL	2×70mL	4×70mL	2～8℃
50%甘油	30mL	60mL	120mL	室温
PAGE胶凝固剂	0.25g	0.5g	1.0g	室温
PAGE胶促凝剂	400μL	750μL	1.5mL	室温，避光

保存：按标签指示条件保存，有效期一年。

注意事项：

10% PAGE胶凝固剂配制后分装-20℃保存。该溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换，使用-20℃保存的10% PAGE胶凝固剂。
在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。
Acr/Bis具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
本制品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

配胶说明：
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，凝胶浓度配方参考附表。

分离胶				夹层胶	浓缩胶
	20%/4.5mL	16.5%/4.5mL	15.5%/4.5mL	10%/2mL	4%/2mL
49.5%T 3%C(mL)	/	/	/	0.407	0.160
49.5%T 6%C(mL)	1.82	1.50	1.395	/	/
凝胶缓冲液(mL)	1.50	1.50	1.50	0.667	0.496
50%甘油(mL)	0.96	0.96	0.96	/	/
ddH2O(mL)	0.22	0.54	0.645	0.926	1.344
10% PAGE胶凝固剂(μL)	40	40	40	20	20
PAGE胶促凝剂(μL)	5	5	5	3	3

使用方法：

配制分离胶：
- 将不同体积的双蒸水、49.5%T 6%C、凝胶缓冲液和甘油加入到离心管中混合。
- 加入10% PAGE胶凝固剂和PAGE胶促凝剂，立即涡旋混匀5～10秒，以使溶液充分混匀。
- 在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液（1mm mini-gel，分离胶溶液加约4mL），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层，使凝胶表面保持平整。
- 静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
配制夹层胶：
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。
- 将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。
- 加入10% PAGE胶凝固剂和PAGE胶促凝剂，立即涡旋混匀5～10秒，以使溶液充分混匀。
- 将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面（对于1mm的mini-gel，夹层胶溶液加约1mL），然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层水层，使凝胶表面保持平整。
- 静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
配制浓缩胶：
去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
- 将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。
- 加入10% PAGE胶凝固剂和PAGE胶促凝剂，立即涡旋混匀5～10秒，以使溶液充分混匀。
- 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
- 待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
- 进行电泳操作。
电泳：
将电泳槽放入4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液），内槽加入阴极缓冲液，30V预电泳10min，将样品（已经过2×Tris-Tricine-SDS-PAGE上样缓冲液(含DTT)处理）加入点样孔后30V电泳1小时，100V电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。

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