产品货号:
QN1075
中文名称:
BCA蛋白浓度测定试剂盒
英文名称:
BCA Protein Assay Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
简要说明:
检测原理:
产品组成:
保存:室温,其中,有效期1年。
注意事项:
使用方法:
一、微孔酶标仪法
二、分光光度计法
如没有酶标仪,可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。步骤如下:
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常用浓度的去垢剂SDS、Triton X-100、Tween不影响本试剂盒的检测结果,但受螯合剂(EDTA/EGTA)、还原剂(DTT/巯基乙醇)和脂类的影响。实验中,若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高,可试用Bradford法蛋白浓度测定试剂盒。
检测原理:
碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+,Cu+与BCA试剂形成紫蓝色的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。
产品组成:
| 组分 | 规格 | 保存 |
| BCA试剂 | 100mL | 室温 |
| Cu试剂 | 3mL | |
| PBS稀释液 | 30mL | |
| BSA蛋白标准(5mg/mL) | 1mL | -20℃ |
保存:室温,其中,有效期1年。
注意事项:
- 长期不用时,Cu试剂与PBS稀释液可置于2~8℃保存,如发现细菌污染则应丢弃。BCA试剂在低温条件下出现结晶沉淀时,可37℃温育使其完全溶解,不影响使用。
- 样品中若含有较多干扰物质时,请采用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法:
一、微孔酶标仪法
- 配制工作液:根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制成BCA工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。
- 稀释标准品:取10μL BSA标准品用PBS稀释至100μL(样品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/mL。将标准品按0、2、4、6、8、12、16、20μL加到96孔板的蛋白标准品孔中,加PBS补足至20μL。
- 将样品作适当稀释(最好多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20μL到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量样品时误差偏大,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
- 各孔加入200μL BCA工作液,37℃放置15~30分钟。用酶标仪测定A562nm,根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时,应注意防止因水分蒸发影响检测结果。
二、分光光度计法
如没有酶标仪,可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。步骤如下:
- 配制工作液:根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制成BCA工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。
- 稀释标准品:取100μL BSA标准品用PBS稀释至1mL(样品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/mL。
- 取八支(或者更多)5mL离心管,标上号,按下表加入试剂。
离心管号 1 2 3 4 5 6 7(样品管1) 8(样品管2) 9(样品管3) 标准蛋白BSA(μL) 0 40 80 120 160 200 200(适当稀释样品1) 200(适当稀释样品2) … PBS(μL) 200 160 120 80 40 0 0 0 0 BCA工作液 2mL - 37℃放置15~30分钟。用分光光度计测562nm处吸光值,根据标准曲线计算出蛋白浓度。
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