产品货号：
MT0081
中文名称：
His标签蛋白纯化树脂
英文名称：
Ni-NTA Resin
产品规格：
20mL(50％浆体)
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是用于纯化6xHis标签重组蛋白的一种纯化介质，它是由4%交联的Sepharose耦连了一种四齿螯合剂NTA而得.Ni-NTA树脂用于在非变性或变性条件下纯化任何表达系统表达的6×His标签重组蛋白。NTA，含有四个螯合区，较一般的三齿螯合剂能更好的结合Ni2+。6×His可与Ni2+螯合，从而使His标签蛋白结合在Ni-NTA纯化介质上，未结合的蛋白被洗涤下去，结合在介质上的蛋白经过一定浓度的咪唑或低PH缓冲液被温和的洗脱下来，从而得到高纯度的目的蛋白。
产品特点：
1．该纯化介质与His标签蛋白具有极高的亲和力，可达5～20mg/ml。
2．可在非变性和变性条件下纯化任何表达系统所得的His标签蛋白。
3．纯化程序简单，所得的蛋白纯度可高达95％。
4．Ni-NTA Resin可再生4～6次，重复使用。
产品应用：
1．His标签蛋白的纯化。
2．蛋白结构与功能研究。
3．蛋白-蛋白以及蛋白-DNA之间相互作用的研究。
4．配体-受体之间相互作用的研究。
应用实例：
PET28a系统于BL21(DE3)中诱导表达蛋白。M:中分子量蛋白Marker（MT0073），泳道1-5分别为：未诱导全菌蛋白，加IPTG诱导全菌蛋白，过柱液，洗涤液，洗脱液。
保存条件：4℃保存，切勿冻存。
操作方法：
A．非变性条件下抽提His标签蛋白：
1.样品准备：
1)准备细胞，接种，诱导表达。对于实验室用的pET载体表达系列，在细胞OD600=0.5～0.8时，用1mM IPTG诱导1～3小时，可以获得理想的表达效率。收集细胞，置于-70℃或立即进行步骤2操作。
2)加入1/20细胞生长体积的NTA-0 Buffer（20mM Tris-HCl pH7.9,0.5M NaCl,10% Glycerol)和1mM PMSF。
注意：PMSF见水分解，需要在使用前加入。
3)将细胞悬浮起来，超声或匀浆破碎细胞。该步骤冰上操作。
4)加入10% Triton X-100，使终浓度为0.05%，充分混匀，冰上放置15分钟。
5) 13000转/分(20000g以上)，4℃离心15分钟。取上清，置于冰上备用或-20℃保存。
2．层析：
1)将NTA树脂装入合适的层析柱，层析用10倍NTA体积的NTA-0 Buffer平衡填料。
2)将上清样品加至NTA层析柱中，流速在15mL/h左右，收集穿透部分，用于SDS/PAGE分析蛋白质的结合情况。
3)层析用5倍NTA体积的NTA-0 Buffer洗涤填料，流速控制在30mL/h左右。
4)再分别用5倍NTA体积的NTA-20、NTA-50、NTA-100、NTA-250洗脱填料，流速控制在15mL/h左右，收集洗脱液，每管收集一个NTA体积。
5)确定目标蛋白质在洗脱液中的分布情况。最为有效的方式是SDS/PAGE分析。也可以用Bradford蛋白质测定试剂盒，快速确定蛋白质的含量，然后用SDS/PAGE分析蛋白质的分布。
6)目标蛋白质需要进一步纯化需要根据蛋白质的用途确定。纯化的目标蛋白质的保存条件需要根据蛋白质的性质和用途确定。
3．溶液配方：
NTA-0 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol
NTA-20 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,20mM Imidazole(咪唑)
NTA-50 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,50mM Imidazole(咪唑)
NTA-100 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,100mM Imidazole(咪唑)
NTA-250 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,250mM Imidazole(咪唑)
B．变性条件下从包涵体中纯化His标签蛋白：
1．样品准备：
1)准备细胞，接种，诱导表达。对于实验室用的pET载体表达系列，在细胞OD600=0.5～0.8时，用1mM IPTG诱导1～3小时，可以获得理想的表达效率。收集细胞，置于-70℃或立即进行步骤2操作。
2)加入1/20细胞生长体积的GuNTA-0 Buffer和1mM PMSF。
PMSF见水分解，需要在使用前加入。
3)将细胞悬浮起来，冰上超声破碎细胞。
4)室温放置30分钟，间或混匀或用磁力搅拌。
5) 13000转/分，4℃离心15分钟。取上清，置于冰上备用或-20℃保存。
2．层析：
1)将NTA树脂装入合适的层析柱，层析用10倍NTA体积的GuNTA-0 Buffer洗。
2)将样品加到NTA层析柱中，流速控制在15mL/h左右，收集穿透部分，用于SDS/PAGE分析蛋白质的结合情况。
3)层析用5倍NTA体积的GuNTA-0 Buffer洗，流速控制在30mL/h左右。
4)分别用5倍NTA体积GuNTA-20、GuNTA-50、GuNTA-100、GuNTA-250洗脱，流速在15mL/h左右，收集洗脱液，每管收集一个NTA体积。
5)确定目标蛋白质在洗脱液中的分布情况。最为有效的方式是SDS/PAGE分析。也可以用Bradford蛋白质测定试剂盒，快速确定蛋白质的含量，然后用SDS/PAGE分析蛋白质的分布。
6)目标蛋白质需要进一步纯化需要根据蛋白质的用途确定。
7)纯化的目标蛋白质需要复性，复性常用的手段可以参考有关手册确定的原则，根据蛋白质的特性来摸索具体的方案。
3．溶液配方：
GuNTA-0 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,6M Guanidium HCl
GuNTA-20 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,6M Guanidium HCl,20mM Imidazole
GuNTA-50 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,6M Guanidium HCl,50mM Imidazole
GuNTA-100 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,6M Guanidium HCl,100mM Imidazole
GuNTA-250 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,6M Guanidium HCl,250mM Imidazole
附：NTA树脂的再生
NTA树脂在使用若干次数(3～5次)后，结合效率有所下降，可以用以下方法再生，提高树脂的使用寿命和蛋白质的结合效率。NTA树脂再生前需要从层析柱下端流干所有溶液，估计出NTA的树脂体积，按下列次序将再生试剂加到层析柱里，在等上一再生溶液流干后，再加下一再生溶解。用户需要自行准备25%、50%、75%、100%(v/v)乙醇和去离子水。
NTA再生步骤：
1)从层析柱下端流干所有溶液，用2倍NTA树脂体积的Stripping Solution I洗。
2)用2倍体积的去离子水洗。
3)用3倍体积的Stripping Solution II洗。
4)用1倍体积的25%乙醇洗。
5)用1倍体积的50%乙醇洗。
6)用1倍体积的75%乙醇洗。
7)用5倍体积的100%乙醇洗。
8)用1倍体积的75%乙醇洗。
9)用1倍体积的50%乙醇洗。
10)用1倍体积的25%乙醇洗。
11)用1倍体积的去离子水洗。
12)用5倍体积的Stripping Solution III洗。
13)用3倍体积的去离子水洗。
14)如果立即使用，用5倍体积的Ni Charging Solution洗，再用10倍体积的平衡溶液(NTA-0 Buffer或GuNTA-0 Buffer)洗。
15)如果想长期储存，加入1倍体积的20%乙醇，4℃保存，使用前需要执行步骤14。
Stripping Solution I：6M GuHCl,0.2M acetic acid
Stripping Solution II：2% SDS
Stripping Solution III：100mM EDTA(pH8.0)
Ni Charging Solution：100mM NiSO4
相关搜索：His标签蛋白纯化树脂，Ni-NTA，His标签纯化介质，Ni-NTA Resin
产品特点：
1．该纯化介质与His标签蛋白具有极高的亲和力，可达5～20mg/ml。
2．可在非变性和变性条件下纯化任何表达系统所得的His标签蛋白。
3．纯化程序简单，所得的蛋白纯度可高达95％。
4．Ni-NTA Resin可再生4～6次，重复使用。
产品应用：
1．His标签蛋白的纯化。
2．蛋白结构与功能研究。
3．蛋白-蛋白以及蛋白-DNA之间相互作用的研究。
4．配体-受体之间相互作用的研究。
应用实例：
PET28a系统于BL21(DE3)中诱导表达蛋白。M:中分子量蛋白Marker（MT0073），泳道1-5分别为：未诱导全菌蛋白，加IPTG诱导全菌蛋白，过柱液，洗涤液，洗脱液。
保存条件：4℃保存，切勿冻存。
操作方法：
A．非变性条件下抽提His标签蛋白：
1.样品准备：
1)准备细胞，接种，诱导表达。对于实验室用的pET载体表达系列，在细胞OD600=0.5～0.8时，用1mM IPTG诱导1～3小时，可以获得理想的表达效率。收集细胞，置于-70℃或立即进行步骤2操作。
2)加入1/20细胞生长体积的NTA-0 Buffer（20mM Tris-HCl pH7.9,0.5M NaCl,10% Glycerol)和1mM PMSF。
注意：PMSF见水分解，需要在使用前加入。
3)将细胞悬浮起来，超声或匀浆破碎细胞。该步骤冰上操作。
4)加入10% Triton X-100，使终浓度为0.05%，充分混匀，冰上放置15分钟。
5) 13000转/分(20000g以上)，4℃离心15分钟。取上清，置于冰上备用或-20℃保存。
2．层析：
1)将NTA树脂装入合适的层析柱，层析用10倍NTA体积的NTA-0 Buffer平衡填料。
2)将上清样品加至NTA层析柱中，流速在15mL/h左右，收集穿透部分，用于SDS/PAGE分析蛋白质的结合情况。
3)层析用5倍NTA体积的NTA-0 Buffer洗涤填料，流速控制在30mL/h左右。
4)再分别用5倍NTA体积的NTA-20、NTA-50、NTA-100、NTA-250洗脱填料，流速控制在15mL/h左右，收集洗脱液，每管收集一个NTA体积。
5)确定目标蛋白质在洗脱液中的分布情况。最为有效的方式是SDS/PAGE分析。也可以用Bradford蛋白质测定试剂盒，快速确定蛋白质的含量，然后用SDS/PAGE分析蛋白质的分布。
6)目标蛋白质需要进一步纯化需要根据蛋白质的用途确定。纯化的目标蛋白质的保存条件需要根据蛋白质的性质和用途确定。
3．溶液配方：
NTA-0 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol
NTA-20 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,20mM Imidazole(咪唑)
NTA-50 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,50mM Imidazole(咪唑)
NTA-100 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,100mM Imidazole(咪唑)
NTA-250 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,250mM Imidazole(咪唑)
B．变性条件下从包涵体中纯化His标签蛋白：
1．样品准备：
1)准备细胞，接种，诱导表达。对于实验室用的pET载体表达系列，在细胞OD600=0.5～0.8时，用1mM IPTG诱导1～3小时，可以获得理想的表达效率。收集细胞，置于-70℃或立即进行步骤2操作。
2)加入1/20细胞生长体积的GuNTA-0 Buffer和1mM PMSF。
PMSF见水分解，需要在使用前加入。
3)将细胞悬浮起来，冰上超声破碎细胞。
4)室温放置30分钟，间或混匀或用磁力搅拌。
5) 13000转/分，4℃离心15分钟。取上清，置于冰上备用或-20℃保存。
2．层析：
1)将NTA树脂装入合适的层析柱，层析用10倍NTA体积的GuNTA-0 Buffer洗。
2)将样品加到NTA层析柱中，流速控制在15mL/h左右，收集穿透部分，用于SDS/PAGE分析蛋白质的结合情况。
3)层析用5倍NTA体积的GuNTA-0 Buffer洗，流速控制在30mL/h左右。
4)分别用5倍NTA体积GuNTA-20、GuNTA-50、GuNTA-100、GuNTA-250洗脱，流速在15mL/h左右，收集洗脱液，每管收集一个NTA体积。
5)确定目标蛋白质在洗脱液中的分布情况。最为有效的方式是SDS/PAGE分析。也可以用Bradford蛋白质测定试剂盒，快速确定蛋白质的含量，然后用SDS/PAGE分析蛋白质的分布。
6)目标蛋白质需要进一步纯化需要根据蛋白质的用途确定。
7)纯化的目标蛋白质需要复性，复性常用的手段可以参考有关手册确定的原则，根据蛋白质的特性来摸索具体的方案。
3．溶液配方：
GuNTA-0 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,6M Guanidium HCl
GuNTA-20 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,6M Guanidium HCl,20mM Imidazole
GuNTA-50 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,6M Guanidium HCl,50mM Imidazole
GuNTA-100 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,6M Guanidium HCl,100mM Imidazole
GuNTA-250 Buffer：20mM Tris-HCl(pH7.9),0.5M NaCl,10% Glycerol,6M Guanidium HCl,250mM Imidazole
附：NTA树脂的再生
NTA树脂在使用若干次数(3～5次)后，结合效率有所下降，可以用以下方法再生，提高树脂的使用寿命和蛋白质的结合效率。NTA树脂再生前需要从层析柱下端流干所有溶液，估计出NTA的树脂体积，按下列次序将再生试剂加到层析柱里，在等上一再生溶液流干后，再加下一再生溶解。用户需要自行准备25%、50%、75%、100%(v/v)乙醇和去离子水。
NTA再生步骤：
1)从层析柱下端流干所有溶液，用2倍NTA树脂体积的Stripping Solution I洗。
2)用2倍体积的去离子水洗。
3)用3倍体积的Stripping Solution II洗。
4)用1倍体积的25%乙醇洗。
5)用1倍体积的50%乙醇洗。
6)用1倍体积的75%乙醇洗。
7)用5倍体积的100%乙醇洗。
8)用1倍体积的75%乙醇洗。
9)用1倍体积的50%乙醇洗。
10)用1倍体积的25%乙醇洗。
11)用1倍体积的去离子水洗。
12)用5倍体积的Stripping Solution III洗。
13)用3倍体积的去离子水洗。
14)如果立即使用，用5倍体积的Ni Charging Solution洗，再用10倍体积的平衡溶液(NTA-0 Buffer或GuNTA-0 Buffer)洗。
15)如果想长期储存，加入1倍体积的20%乙醇，4℃保存，使用前需要执行步骤14。
Stripping Solution I：6M GuHCl,0.2M acetic acid
Stripping Solution II：2% SDS
Stripping Solution III：100mM EDTA(pH8.0)
Ni Charging Solution：100mM NiSO4
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