产品货号：
MT0068
中文名称：
Benzonase核酸酶
英文名称：
Benzonase Nuclease
产品规格：
25kU|100kU|10000kU
发货周期：
1～3天
产品价格：
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Benzonase Nuclease是一种核酸内切酶，可将核酸降解成2～5个碱基的5‘单磷酸核苷酸，因其能高效降解任何形式（双链，单链，线状，环状）的DNA和RNA而没有蛋白裂解活性，又被称为“全能核酸酶”。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白样品粘度，去除蛋白样品中核酸的污染，且无蛋白酶活性残留，核酸酶活性达1×106U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同时，也具有多种其他用途，如：减少了样品处理时间，增加了蛋白产量，离心时时沉淀和上清分离的更彻底，更便于溶液的离心（尤其是超滤）；提高色谱纯化的效率等。
不同Benzonase核酸酶的用途及用量推荐：
| 实验类型 | 电泳蛋白样品制备 | 非药物蛋白生产 | 药物蛋白生产 | 疫苗、病毒生产 | 细胞药物 |
| 推荐货号 | MT0068：科研试剂 | MT0068：科研试剂 MT0170：Strep II标签 | MT0169：无内毒素 MT0171：无内毒素，Strep II标签 | ||
| 细胞数量 | 1×106个细胞(10mg组织) | 1g湿重（重悬液10mL） | 1L发酵上清液 | 1L培养物 | |
| 最低用量 | 125U(0.5μL) | 25U/mL(1μL) | 25U/mL(1μL) | 0.1U/mL(0.4μL) | 0.1U/mL(0.4μL) |
| 推荐用量 | 500U(2μL) | 250U/mL(10μL) | 250U/mL(10μL) | 25U/mL(100μL) | 5U/mL(20μL) |
| 作用时间 | 通常作用时间37℃在15～60min；25℃在30～120min。 | ||||
- 带Strep II标签核酸酶可在消化完核酸后通过Strep Tactin XT Resin（货号：MT0180）高效去除。
- 无内毒素的两种Benzonase核酸酶，内毒素含量<40EU/mL（按照单位换算量计算为，每1000U中含有的内毒素<0.15EU），可适用于药用级别的研发和生产。
- 另外，核酸酶残留可通过我公司开发的基于荧光探针的Benzonase核酸酶残留检测试剂盒(MT0181)进行评测，15min即可完成检测，最低可检测到2ng/mL的核酸酶残留。
- 蛋白提取时去除核酸污染：在重组蛋白纯化或组织细胞样品蛋白提取时，Benzonase核酸酶可有效降低样品粘度，利于下游操作；
- 与细胞或细菌裂解液配合使用，去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性，提高蛋白质产量；
- 减少存放的外周血单细胞(PBMC)的结块现象；
- 降解核酸，利于不可溶性蛋白复性前高质量包涵体制备；
- 有效去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响，改善蛋白质的分离效果，增强2-DE分辨率；
- 疫苗和病毒样品制备中DNA污染的去除。
- 蛋白提取时去除核酸污染
- 2D凝胶电泳
- Western Blot
- IP- Western
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| 图1：分别取不同量（0、0.125、0.25、0.5、1、5、10U）的Benzonase核酸酶消化人基因组DNA10min，进行琼脂糖电泳。 | 图2：A为未加Benzonase处理的，B为加Benzonase处理的样品进行二维电泳。如图所示，Benzonase处理的样品可显著增加二维电泳的分辨率。 |
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| 图3：经RIPA裂解未经Benzonase核酸酶处理的样品，大量基因组DNA释放出来，呈鼻涕状。 | 图4：离心后，左管为未加Bezonase核酸酶，有鼻涕状粘稠物质悬浮在管中，右管为加Bezonase核酸酶，上清为透明液体。 |
Benzonase核酸酶在非常广泛的条件下，都能保持很高的稳定性和消化核酸的活性，这使其能够与多种细胞裂解液，如RIPA，或含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂等兼容。例如：>100mM的盐酸胍会完全抑制Benzonase活性，1mM的EDTA会部分抑制Benzonase活性，5mM的EDTA会使活性丧失90%，1mM的PMSF则不会抑制核酸酶活性。浓度<0.4%的Triton?X-100对核酸酶活性几乎无影响，<0.4%的脱氧胆酸钠使核酸酶可保持70%的活性，超过该临界值之后核酸酶活性会急剧降低，1%的浓度会使活性丧失70%；0.05%的SDS对核酸酶活性几乎无影响，而SDS浓度在0.1%～1%之间时，核酸酶在变性后活性会急剧降低，可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。另外，核酸酶可耐受6M尿素，当尿素达到7M时，核酸酶在变性后活性会急剧降低，亦可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。
| 条件参数 | 最适条件 | 可作用条件范围 |
| Mg2+ | 1～2mM | 1～10mM |
| pH | 8.0–9.2 | 6–10 |
| 温度 | 37℃ | 0～42℃ |
| DTT | 0～100mM | ＞100mM |
| β-Mercaptoethanol | 0～100mM | ＞100mM |
| 一价阳离子浓度（如Na+，K+） | 0～20mM | 0～150mM |
| PO43- | 0～10mM | 0～100mM |
37℃，pH8.0反应条件下，在30分钟内使△A260值降低1.0(相当于完全消化37μg DNA)的酶量定义为一个活性单位。
注意：含大量蛋白、细胞壁、其它盐分的粗制品，对该酶活性有部分抑制作用，使用时需要增加酶的用量。
| 组分 | 25KU | 100KU | 10000KU |
| Benzonase核酸酶(250kU/mL) | 100μL | 400μL | 40×1mL |
| 说明书 | 1份 | ||
保存：-20℃，有效期2年。
- 组织处理方法：将30～50mg动植物组织研磨充分后，加入100～200μL RIPA裂解液(货号：MT0066)，同时加入1μL Benzonase核酸酶，旋涡振荡混合均匀，室温孵育30min。
- 细胞处理方法：将106-107悬浮细胞液6000rpm离心10min后，弃掉上清液，使用100μL RIPA裂解液重悬细胞，同时加入1μL Benzonase核酸酶，旋涡振荡混合均匀，室温孵育30min。
注意：贴壁细胞重悬于PBS后，处理方法同悬浮细胞。 - 大肠杆菌细胞处理：将500μL E.coli培养液8000rpm离心5min后，弃掉上清液，使用100μL大肠杆菌裂解液(货号：MT0067)重悬细胞，同时加入1μL Benzonase核酸酶，旋涡振荡混合均匀，室温孵育30min。
- 裂解步骤完成后，将裂解产物于13000rpm离心10min后，取上清即为提取蛋白（包涵体蛋白留取沉淀为提取蛋白）。
- 提取完蛋白后可利用BCA蛋白定量试剂盒(货号：MT0072)测定蛋白浓度。
Benzonase核酸酶残留去除：
对于Strep II标签的Benzonase核酸酶（MT0170，MT0171）可通过Strep Tactin XT Resin（MT0180）直接去除，去除率>95%；对于不带标签的Benzonase核酸酶（MT0068，MT0169），可通过色谱纯化去除核酸酶，然后可通过核酸酶残留检测试剂盒（MT0181）或ELISA检测来判断去除是否成功。常见的色谱纯化方式有阳离子交换介质和阴离子交换介质，具体的Benzonase去除条件如下表：
| 阴离子交换介质 | pH | 样品和平衡缓冲液 | Benzonase核酸酶 | 阳离子交换介质 | pH | 样品和平衡缓冲液 | Benzonase核酸酶 | |
| TMAE | 7 | 50mM Tris/200mM NaCl | not bound | SO3- | 6 | 20mM phosphate/100mM NaCl | bound | |
| TMAE | 7 | 50mM Tris/50mM NaCl | not bound | SO3- | 6 | 20mM phosphate/200mM NaCl | not bound | |
| TMAE | 8 | 50mM Tris/250mM NaCl | not bound | SO3- | 5 | 20mM acetate/200mM NaCl | bound | |
| TMAE | 8 | ＞50mM Tris/100mM NaCl | not bound | SO3- | 5 | ＞20mM acetate/700mM NaCl | not bound | |
| TMAE | 9 | ＞50mM Tris/200mM NaCl | not bound | SO3- | 4 | ＞20mM acetate/300mM NaCl | bound | |
| TMAE | 9 | 50mM Tris/100mM NaCl | not bound | SO3- | 4 | 20mM acetate/800mM NaCl | not bound | |
| DEAE | 7 | 50mM Tris/200mM NaCl | not bound | C00- | 6 | 20mM phosphate/0mM NaCl | not bound | |
| DEAE | 7 | 50mM Tris/50mM NaCl | not bound | C00- | 5 | 20mM acetate/40mM NaCl | bound | |
| DEAE | 8 | 50mM Tris/250mM NaCl | not bound | C00- | 5 | 20mM acetate/100mM NaCl | not bound | |
| DEAE | 8 | ＞50mM Tris/100mM NaCl | not bound | C00- | 4 | ＞20mM acetate/150mM NaCl | partially bound | |
| DEAE | 9 | ＞50mM Tris/250mM NaCl | not bound | C00- | 4 | 20mM acetate/400mM NaCl | not bound | |
| DEAE | 9 | 50mM Tris/50mM NaCl | not bound | |||||
| DMAE | 8 | ＞50mM Tris/250mM NaCl | not bound | |||||
| DMAE | 8 | 50mM Tris/50mM NaCl | not bound |
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