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本试剂盒提供了配制非变性聚丙烯酰胺凝胶的各种试剂，用户只需自备制胶器和纯水，即可配制非变性凝胶进行非变性蛋白质电泳。试剂盒中4×分离胶缓冲液和4×浓缩胶缓冲液分别含有Tris-HCl (pH8.8)和Tris-HCl (pH6.8)，使用方便、快捷。本试剂盒大约可以配制30～50块常规大小的PAGE胶，具体配制的量应根据器具大小决定。

• 过硫酸铵溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的10%APS。
  
• PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关；在其它条件不变的情况下，可通过改变APS及TEMED的用量，控制PAGE凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作；附表中的10%APS及TEMED量可供参考，应根据实际操作情况做适当的调整。
  
• 在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
  
• 在分离胶上层加纯水时要小心操作，加水时速度不能太快。
  
• 本试剂盒主要适用于分离酸性蛋白，同时注意蛋白上样缓冲液和电泳缓冲液都不能含有SDS等蛋白变性剂。
  
• TEMED易挥发，有轻微刺激性气味，易燃，有腐蚀性，使用时注意防护。
  
• 配胶用丙烯酰胺有神经毒性，可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套。聚丙烯酰胺(聚合后)无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成分。
  
• 为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

• 配制10% APS：用5mL蒸馏水溶解0.5g过硫酸铵(APS)，充分溶解后分装成小管储存于-20℃。
  
• 灌制分离胶
  
  • 根据样品情况选择合适的分离胶浓度，各试剂使用量请参考附表1。
    
  • 参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
    
  • 将不同体积的30% Acr-Bis (29:1)、4×分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。
    
  • 加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
    
  • 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1cm的水层，使凝胶表面保持平整。
    
  • 静置30～60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
• 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表2)
  
  • 去除覆盖在分离胶上的水层。
    
  • 将不同体积的30% Acr-Bis (29:1)、4×浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
    
  • 加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
    
  • 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
    
  • 将梳子慢慢插入凝胶内，避免产生气泡。
    
  • 静置20～30分钟，等待浓缩胶聚合。
    
  • 待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
    
  • 进行常规电泳操作。