产品货号:
KFS438
中文名称:
BCA蛋白含量检测试剂盒
英文名称:
BCA Protein Quantitation Assay Kit
产品规格:
50T|100T|500T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成,实现了蛋白浓度测定的简单,高稳定性,高灵敏度和高兼容性。本试剂盒检测浓度下限达到5μg/mL,最小检测蛋白量达到0.5微克,待测样品体积为1~20微升。
组分 | 50T | 100T | 500T |
蛋白标准溶液(0.5μg/μL) | 5mL | 10mL | 100mL |
BCA试剂A | 50mL | 100mL | 1000mL |
BCA试剂B | 1mL | 2mL | 20mL |
保存:室温,有效期1年。
- 配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。
- 加入BCA工作液后,也可以在室温放置2小时,或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时,吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或延长孵育时间。
- 待测样品浓度在50~2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
- BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20,60,80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM,无EGTA,二硫苏糖醇低于1mM,β-巯基乙醇低于1mM.不适用BCA法时建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
- 操作时要带手套。
一、酶标板操作
- 标准曲线的绘制:
- 取一块酶标板,按照下表加入试剂
孔号 0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白标准溶液(μL) 0 1 2 4 8 12 16 20 去离子水(μL) 20 19 18 16 12 8 4 0 对应蛋白含量(μg) 0 0.5 1.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 - 根据标准孔的数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀;
- 各孔加入200μL BCA工作液;
- 把酶标板放在振荡器上振荡30sec,37℃放置30分钟,然后在562nm下比色测定。以蛋白含量(μg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线;
- 标准检测程序——37℃,30分钟(检测蛋白浓度范围0~500μg/mL)
- 室温检测程序——2小时(检测蛋白浓度范围10~2000μg/mL)
- 增强检测方案——60℃,30minutes (检测蛋白浓度范围5~250μg/mL)
- 标准检测程序——37℃,30分钟(检测蛋白浓度范围0~500μg/mL)
- 取一块酶标板,按照下表加入试剂
- 样品检测:
- 稀释待测样品至合适浓度,使样品稀释液总体积为20μL,加入BCA工作液200μL,充分混匀,37℃放置30分钟后,以标准曲线0号管做参比,在562nm波长下比色,记录吸光值;
- 根据所测样品的吸光值,在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量(μg),除以样品稀释液总体积(20μL),乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位:μg/μL)。
- 稀释待测样品至合适浓度,使样品稀释液总体积为20μL,加入BCA工作液200μL,充分混匀,37℃放置30分钟后,以标准曲线0号管做参比,在562nm波长下比色,记录吸光值;
二、分光光度计测定
- 标准曲线的绘制:
- 各管按照下表加入试剂
孔号 0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白标准溶液(μL) 0 5 10 20 40 60 80 100 去离子水(μL) 100 95 90 80 60 40 20 0 对应蛋白含量(μg) 0 2.5 5.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 - 根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀;
- 各管加入1000μL BCA工作液;
- 各管充分混匀,37℃放置30分钟,然后在562nm下比色测定。以蛋白含量(μg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线;
- 标准检测程序——37℃,30分钟(检测蛋白浓度范围20~2000μg/mL)
- 室温检测程序——2小时(检测蛋白浓度范围20~2000μg/mL)
- 增强检测方案——60℃,30minutes (检测蛋白浓度范围5~250μg/mL)
- 标准检测程序——37℃,30分钟(检测蛋白浓度范围20~2000μg/mL)
- 各管按照下表加入试剂
- 样品检测:
- 稀释待测样品至合适浓度,样品稀释液总体积为100μL,加入BCA工作液1000μL,充分混匀,37℃放置30分钟后,以标准曲线0号管做参比,在562nm波长下比色,记录吸光值;
- 根据所测样品的吸光值,在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量(μg),除以样品稀释液总体积(100μL),乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位:μg/μL)。
- 稀释待测样品至合适浓度,样品稀释液总体积为100μL,加入BCA工作液1000μL,充分混匀,37℃放置30分钟后,以标准曲线0号管做参比,在562nm波长下比色,记录吸光值;
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