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Bradford分光光度法测定蛋白含量要比Lowry方法简单迅速，是测定蛋白含量的首选方法。此定量方法是利用考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合的特性，当考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后，溶液呈蓝色，在波长595nm有较高的吸收值，而且在一定的范围内与蛋白质的含量呈线性关系。

此方法的优点是考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合的时间短(大约为2分钟)，且结合的考马斯亮蓝G-250-蛋白质复合物在溶液中可维持1小时左右。

1. 比色应在出现蓝色2min～1h内完成；
   
2. 考马斯亮蓝G-250溶液具有腐蚀性，操作时要带手套。

1. 试管操作
   
   1. 标准曲线的绘制：
      取6个带盖的1.5mL离心管，编好号后，按下表加入试剂：
      

      管号	0	1	2	3	4	5
      考马斯亮蓝G-250溶液(μL)	990	990	990	990	990	990
      去离子水(μL)	10	8	6	4	2	0
      蛋白质标准溶液(μL)	0	2	4	6	8	10
      蛋白质含量(μg)	0	2	4	6	8	10

   2. 盖上盖子，混匀。放置2min后在595nm下比色测定(比色应在1h内完成)。以蛋白含量(μg)为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；
      
   3. 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为10μL，加入考马斯亮蓝G-250溶液990μL，充分混匀，放置2min后，以标准曲线0号管做参比，在595nm波长下比色，记录吸光值；
      
   4. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白质含量(μg)，除以样品稀释液总体积(10μL)，乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度。
2. 酶标板操作
   
   1. 标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂：
      

      孔号	0	1	2	3	4	5
      考马斯亮蓝G-250溶液(μL)	195	195	195	195	195	195
      去离子水(μL)	5	4	3	2	1	0
      蛋白质标准溶液(μL)	0	1	2	3	4	5
      蛋白质含量(μg)	0	1	2	3	4	5

   2. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，放置2min后再次振荡，然后在595nm下比色测定(比色应在1h内完成)。以蛋白含量(μg)为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；
      
   3. 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为5μL，加入考马斯亮蓝G-250溶液195μL，充分混匀，放置2min后，以标准曲线0号管做参比，在595nm波长下比色，记录吸光值；
      
   4. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白质含量(μg)，除以样品稀释液总体积(5μL)，乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度。