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本试剂盒是根据最常用的BCA蛋白浓度检测法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单化，稳定性高，灵敏度高和兼容性好。最小检测浓度达到25μg/mL，最小检测蛋白量达到0.5μg，样品体积为1～20μL。在50～2000μg/mL浓度范围内有较好的线性关系。BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的TritonX-100，5%的Tween20、Tween60、Tween80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于0.01%。

• 样品加入BCA工作液后，也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟；可以适当用微波炉加热来加快BCA法测定蛋白浓度的速度，但切勿过热。
  
• BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深，且显色反应会因温度升高而加快。如果蛋白浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。
  
• 可以使用普通的分光光度计测定，根据比色皿的最小检测体积，按比例放大蛋白样品、标样和BCA工作液的用量，单个试剂盒测定的样品数量会显著减少。
  
• 如样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请选择本公司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
  
• 本试剂盒要求蛋白样品的EDTA浓度必需小于10mM，且不兼容EGTA。

• 取适量5mg/mL蛋白标准液，用PBS稀释液稀释至0.5mg/mL，该液可以-20℃长期保存。
  
• 根据样品数量，取适量A液和B液按50:1体积比充分混匀，配制适量BCA工作液。例如5mL A液加100μL B液，混匀，配制成5.1mL工作液。工作液室温24小时内稳定。
  

  加样顺序	标样编号								样品编号
  标记编号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
  BSA蛋白标样品	0	1μL	2μL	4μL	8μL	12μL	16μL	20μL	20μL 样品	...
  PBS稀释液	20μL	19μL	18μL	16μL	12μL	8μL	4μL	0
  BCA工作液	200μL

  • BSA标样浓度分别为：0、25、50、100、200、300、400、500μg/mL。
• 将BSA蛋白标样，以及适当稀释的蛋白样品，按上表顺序加入96孔板中，标样需用PBS稀释液补足到20μL。每孔加入BCA工作液200μL，37℃放置30min。
  
• 测定A562波长光度值，或选择540～595nm之间波长。绘制标准曲线并计算蛋白浓度。