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两性电解质就是既能当酸又能当碱用的电解质。通常为两性元素的氧化物的水合物、氨基酸等。两性电解质在大于其等电点的pH环境中解离成带负电荷的阴离子，向电场的正极泳动；在小于其等电点的pH环境中解离成带正电荷的阳离子，向电场的负极泳动。这种泳动只有在等于其等电点的pH环境中，即蛋白质所带的净电荷为零时才能停止。两性电解质适用于植物蛋白的等电聚焦。

两性电解质的常用浓度为2%～2.5%，2%用于2mm厚的凝胶，2.5%用于0.5mm厚的凝胶，3%用于超薄胶。pH梯度范围的选择取决于被分析的蛋白质的等电点。对于未知的样品通常先用宽的pH范围来找出欲测蛋白质pI的位置，然后再用合适的窄pH范围更好地分辨这些谱带并准确的测定其等电点。使用窄范围的载体两性电解质可以提高分辨率并增加载样量。

• 样品处理：
  
  • 浸泡：先将所需鉴定的种子浸泡一段时间，以备取胚使用。
    
  • 取胚：用镊子把种子的胚取出，放入0.5或1.5mL离心管内。
    
  • 研磨：在离心管内加入0.1mL蔗糖提取液，然后将胚研成匀浆，放入冰箱保存。
• 凝胶制备：
  
  • 配制凝胶前，应把玻璃板准备好。即将两块干净的玻璃板叠放在一起，之间夹上所需凝胶厚度的胶条进行四边密封，一端留有小口用来凝胶。然后用文具夹奖玻璃板四周固定好。注意夹子作用力点在胶条正中，以防漏胶。
    
  • 配制凝胶时，先将所需贮备液自冰箱中取出放置室温。
    
  • 将各种贮备液体按一定比例混合(见表1)最后加入0.5mL 1%过硫酸铵，搅拌均匀。然后用注射器吸净混合液，排除气泡，缓缓注入玻璃板的夹隙内。
    
  • 将注入混合液的玻璃板静置放好，隔夜使用。
    表1：凝胶贮存液配比表
    

    试剂名称	加入量(mL/板)
    30%丙烯酰胺(Acr-Bis)	2.8
    40%蔗糖	1.5
    甘-T	3
    1%TEMED	2.2(夏季)，2.7(冬季)
    蒸馏水	5.5(夏季)，5.0(冬季)
    两性电解质	0.5～0.7

• 电泳：
  
  • 制胶板：将胶板取出，揭去上层的玻璃板和胶条，然后用蒸馏水轻轻冲洗一下胶面。
    
  • 预电泳：将已聚合的聚丙烯酰胺凝胶放到冷却板上，用正极液与负极液分别润湿正极与负极电极条，然后分别放于阳极与阴极上，将电极对准电极条中心，起始电压200V预电泳30min。
    
    • 电泳时的环境温度一般为0～4℃。
  • 上样：样品匀浆与2×上样缓冲液1:1混匀，以5000r/min离心5min，上清液即为上样电泳样品液。
    
  • 电泳：初始50V电压电泳待电流降至每板胶3 mA以下时，加压至200～320V继续电泳，当电泳降至每板胶3 mA以下时，升高电压至500V，继续电泳1.5小时左右，电泳至电流不再变化时，切断电源结束电泳。
    
    • 电泳时的环境温度一般为0～4℃。
  • 取出胶板，进行后续固定与染色。