产品货号:
JN0181
中文名称:
Bradford蛋白浓度测定试剂盒
英文名称:
Bradford Protein Assay Kit
产品规格:
1000T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒是根据最常用的两种蛋白浓度检测方法之一Bradford法研制而成,实现蛋白浓度测定的快速、稳定和高灵敏度。
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- 简单快速:只需要一种反应试剂,检测速度极快,10~20个样品只需不足10分钟即可完成。
- 灵敏度高:检测浓度下限达到25μg/μL,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1~20μL。
- 测量范围广:50~1000μg/μL浓度内有较好的线性关系。
- 抗干扰能力强:不受还原剂(如DTT,巯基乙醇)的影响。而且与一系列干扰Lowry,BCA反应的还原剂(如DTT,巯基乙醇)相容。样品中巯基乙醇的浓度可高至1M,二硫苏糖醇的浓度可高至5mM。
组分 | 规格 | 保存 |
BSA Standard (2mg/mL) | 0.5mL×2 | -20℃ |
Bradford Reagent | 100mL×2 | 4℃ |
- Bradford法对于去污剂比较敏感,需确保SDS低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20,60,80低于0.06%。含去垢剂的样品可使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。
- Bradford染色液中考马斯亮蓝易聚集成团,使用前请颠倒6~8次并竖直抓住瓶口做水平圈动作,旋转瓶中液体,充分混匀,但不可以上下振荡混匀。
- 低温会降低Bradford染色液的敏感度,因此每次使用前需将Bradford染色液恢复至室温。倒出每次需要的Bradford染色液,原瓶放回冰箱,减少复温时间。
- 蛋白标准品请在全部溶解后先混匀,再稀释成一系列不同浓度。标准品曲线配制时,吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小,可根据需要使用倍比梯度稀释的方法,或使用精确度高的加样枪。
- 由于Bradford法在蛋白浓度增高到一定时候,颜色反应并不成比例增加,因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线,每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对精确的蛋白浓度。所测蛋白质浓度应确保处于标准曲线线性范围内,否则测定结果将出现较大误差。每次测定蛋白样品时,应做新的标准曲线。
- 蛋白标准品溶液准备:
取适量2mg/mL蛋白标准品(BSA Standard),稀释至0.5mg/mL。例如,取20μL 2mg/mL蛋白标准品,加入60μL稀释液,配制成0.5mg/mL蛋白标准品。蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。为了简便起见,也可0.9%NaCl或PBS稀释标准品。稀释后的蛋白标准品也可-20℃长期保存。 - 标准曲线制备和样品蛋白测定:
- 标准曲线制备:按下表在96孔板的样品孔中加入各种试剂,加标准品稀释液补足至20μL。然后加入200μL Bradford染色液(Bradford Reagent),室温放置3~5分钟。
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 0.5mg/mL蛋白标准品(μL) 0 1 2 4 8 12 16 20 标准品稀释液(μL) 20 19 18 16 12 8 4 0 Bradford染色液 200μL - 样品蛋白测定:在96孔板的样品孔中加适当体
积的样品,加标准品稀释液到20μL。然后加入200μL Bradford染色液,室温放置3~5分钟。
- 标准曲线制备:按下表在96孔板的样品孔中加入各种试剂,加标准品稀释液补足至20μL。然后加入200μL Bradford染色液(Bradford Reagent),室温放置3~5分钟。
- 用酶标仪测定A595,或560~610nm之间的其它波长的吸光度。然后根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
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