产品货号：
HR8802
中文名称：
植物线粒体蛋白提取试剂盒(蛋白组实验、质谱适用)
英文名称：
Plant Mitochondrial Protein Extraction Kit,Suitable for Proteomics and Mass Spectrometry
产品规格：
50T|100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
产品特点：
产品应用：
产品组成：
保存：蛋白提取液置于2～8℃，蛋白酶抑制剂置于-20℃，有效期1年。
保存事项：
用户自备：
注意事项：
使用方法：
常见问题：
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本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解线粒体膜组分。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒采用非酶法提取，提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，而且绝少交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法较低。酶法提取制备的线粒体总蛋白，回收率提高，蛋白纯度高，保持天然活性，但是耗时较长。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒。请根据实际需要选择试剂盒。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用百奥莱博其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用蛋白脱盐柱脱盐处理。
产品特点：
- 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
- 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
- 本试剂盒的蛋白提取组分中不含有不可透析除去的去垢剂组分，不含SDS、Triton X-100、chaps等可能影响质谱实验的组分，最后得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响，基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。
- 本试剂盒的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移，因此使用本制品提取的蛋白样品可以用于质谱检测和分析，蛋白质组学等相关研究。
产品应用：
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
产品组成：
| 组分 | 50T | 100T |
| 线粒体提取液A | 100mL | 200mL |
| 线粒体提取液B | 50mL | 100mL |
| 蛋白提取液C1 | 22.5mL | 45mL |
| 蛋白提取液C2 | 2.5mL | 5mL |
| 蛋白酶抑制剂混合物 | 100μL | 200μL |
保存：蛋白提取液置于2～8℃，蛋白酶抑制剂置于-20℃，有效期1年。
保存事项：
- 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
- 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
- 有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期，试剂拆封后请尽快使用完。
用户自备：
- 仪器准备：离心机、振荡器、匀浆机/匀浆器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒。
- 试剂准备：1×PBS缓冲液(10mM,pH7.4)、蛋白定量试剂盒。
- 耗材准备：离心管、吸头、100μm细胞筛、一次性手套。
注意事项：
- 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
- 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
使用方法：
- 蛋白提取液准备：将蛋白提取液C1和蛋白提取液C2混合，配成蛋白提取液C，充分混匀备用。每500μL蛋白提取液C中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
- 蛋白提取液C置4℃保存，长期不用的可以分装后-20℃保存。
- 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
- 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
- 以下步骤中提到的蛋白提取液C为本步骤配制的。
- 蛋白提取液C置4℃保存，长期不用的可以分装后-20℃保存。
- 取200～500mg新鲜植物样本叶片，用PBS洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀尽可能剪碎。
- 加入2mL线粒体提取液A后用匀浆机充分匀浆或者加适量线粒体提取液A后用匀浆机/Dounce匀浆器充分匀浆。培养细胞直接收集细胞后用Dounce匀浆器匀浆即可，匀浆后加提取液混匀后直接进行下步离心。
- 将匀浆液用100μm细胞筛过滤。
- 没有细胞筛的话，在4℃，稍微静置，让粗纤维，成团组织块等沉降，或者以低于100×g力条件下离心1分钟，收集细胞上清，弃组织沉淀。
- 有些含黏液较多的样品可能难以吸取，可以将1mL吸头尖稍微剪掉一点使用。
- 液体量较少不好过滤时可以添加PBS。
- 没有细胞筛的话，在4℃，稍微静置，让粗纤维，成团组织块等沉降，或者以低于100×g力条件下离心1分钟，收集细胞上清，弃组织沉淀。
- 将滤液在500×g离心5分钟，弃沉淀，取上清。
- 将上清在800×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
- 将上清在2000×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
- 将上清12000×g离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
- 将沉淀用500μL线粒体提取液B重悬。
- 将悬液12000×g力离心20分钟，弃上清，收集沉淀。
- 在沉淀中加入100～300μL蛋白提取液C，充分混匀。
- 在4℃条件下振荡20～40分钟。
- 振荡时用振荡器/摇床的较低转速，保持液体轻微晃动即可。
- 没有振荡条件也可不振荡，置4℃静置，稍微延长蛋白提取液C处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
- 振荡时用振荡器/摇床的较低转速，保持液体轻微晃动即可。
- 在4℃，14000×g条件下离心15分钟。
- 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到线粒体蛋白。
- 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
- 建议用BCA法进行蛋白定量。
- 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
- 建议用BCA法进行蛋白定量。
- 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于不能含有去污剂/盐的下游实验。
- 蛋白样品中含有盐，需要脱盐处理后用于双向电泳。
- 经透析或脱盐离心柱处理的蛋白样品不含有去垢剂和高浓度盐。
- 蛋白样品中含有盐，需要脱盐处理后用于双向电泳。
常见问题：
- 蛋白浓度低？
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。 - 用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组分，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。 - 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组分，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
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