产品货号：
HR8166
中文名称：
蛋白浓缩试剂盒-浓缩柱法-0.5mL
英文名称：
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
产品组成：
组分名称50T 100T
组份A：蛋白浓缩管（0.5mL） 5个10个
组份B：套管10个20个
组份C：蛋白吸附抑制剂0.5mL 1mL
保存条件：
室温避光保存，有效期1年。
【注】：
● 浓缩柱配有2个微量离心管。
● 在操作过程中，一个可用于收集滤出液，而另一个用于回收浓缩后的样本。
● 用过的浓缩管要保持过滤膜湿润，不能干掉。
产品说明：
蛋白浓缩试剂盒是采用蛋白浓缩离心管快速浓缩小量蛋白样品的试剂盒。
蛋白浓缩离心管是一种方便的蛋白浓缩工具，只需要离心操作即可以用来对蛋白质液体样本进行浓缩，还可以用于抗原、抗体、酶和微生物的浓缩纯化。也可以用来对蛋白质样品进行缓冲液置换。还可以用来分离蛋白质标记时未结合上的游离标记物。
蛋白浓缩柱使用蛋白质低吸附性的再生纤维素过滤膜制造，具有快速、方便、回收率高的特点，可替代并优于透析法及蛋白沉淀法的蛋白浓缩方法。
应用场景：
● 对稀释或从柱洗脱液预先纯化的蛋白质进行浓缩；
● 组织培养提取物或细胞裂解液中蛋白质组分的纯化；
● 生物样品浓缩：包括各种抗原、抗体、酶、微生物；
● 蛋白质缓冲液更换。
产品特点：
● 高回收率>90%；
● 垂直结构的膜减少了浓差极化，加快离心速度，快达5分钟；
● 热密封膜将下游溶出物污染可能性降到最低；
● 100%完整性检测确保性能可靠；
● 透明外壳和体积刻度方便样品察看；
● 直接吸取样品减少处理步骤；
● 高浓缩倍数：高达80～100倍
产品规格参数：
初始样本的最大体积：500μL
最终浓缩液的典型体积：15～20μL
建议的相对离心力：10000×g（浓缩离心）
1000×g（反转离心）
最大的相对离心力：12000×g
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
● 离心机，可容纳1.5mL微量离心管的固定角度转子离心机● 移液器● 纯水● PBS（pH7.4，1×）
使用注意事项：
● 在操作过程中，一个离心套管可用于收集滤出液，而另一个用于回收浓缩后的样本。
● 用过的浓缩管要保持过滤膜湿润，不能干掉。
清洗浓缩管：
1.用缓冲液或纯水进行预清洗。也可先用0.1M NaOH清洗，再用缓冲液或纯水进行二次清洗。
2.离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用，则让液体保留在滤膜上，直到使用。
蛋白样品处理：
1.在500μL蛋白样品中加入5μL蛋白吸附抑制剂。充分混匀待浓缩。
2.吸附抑制剂按照1/100加到待浓缩蛋白样品。
浓缩使用方法：
使用注意事项：
● 不同的蛋白浓缩的速度不同，有的需要长时间离心，有的则很快就好。和蛋白样品纯度，所用buffer类型，蛋白的浓度有关系。离心时要先短些时间，观察一下浓缩速度；
● 如果需要多次重复使用，离心速度不要太高；
● 重复使用时要仔细检查管壁上有没有裂纹；
● 浓缩柱浓缩蛋白会有蛋白损失，样品体积大就分批离心，尽可能不要离心时间太长
● 样品里的杂质如果可能尽量在离心前去除一些。
● 分子量小于5kD的溶质可能只有部分被截留。2kD的样品截留率大约只有40%。目的蛋白小于5kD的样品不要使用浓缩管法浓缩。
● 浓缩液的样本回收率低可能是由于吸附损失、过度浓缩，或样本穿过滤膜而造成的。
● 吸附损失取决于溶质浓度、疏水性、与过滤浓缩管表面接触的温度和时间、样本成分及pH。为了最大限度降低损失，离心后请立即回收浓缩后的样本。
● 如果样本的起始浓度很高，请监控离心过程，以免样本过度浓缩。过度浓缩会导致沉淀，这也可能带来样本损失。
● 样本有可能穿过滤膜，务必将每次的滤过液一直保留到浓缩的样品分析测试完成。
● 样品蛋白最低起始浓度为25μg/mL。
● 加蛋白液或Buffer到浓缩管时，可以用蓝枪头；但从浓缩管底吸取浓缩好的目的蛋白时，必须用黄枪头；用枪头伸入浓缩管中时，必须防止碰到滤膜，以免戳破滤膜。
操作步骤：
1.将内管插入所提供的一个微量离心管中。
2.向内管中加入不超过500μL的样本，并盖上盖子。
3.将盖好盖子的浓缩管放入离心转子中，让盖子的连接带朝着转子的中央；用一个类似的离心管平衡。
4.以2000～10000×g离心约10～30分钟。
【注】：
● 务必将滤过液一直保留到浓缩的样品分析测试完成。
● 影响流速的因素包括样本浓度、起始体积、溶质的化学性质、相对离心力、离心转子的角度、滤膜类型以及温度。500μL样本的典型离心时间大约是10至30分钟。尽管大部分样本在离心开始后的前5至10分钟发生过滤，但在离心10至30分钟后才能达到最低的浓缩液体积（15～20μL）。
5.离心结束后将整个浓缩管从离心机中取出，取出内管。
6.为了回收浓缩后的溶质，将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中，让打开的盖子朝着转子的中央；用一个类似的离心管进行平衡。以1000×g离心2分钟，使浓缩后的样本从浓缩内管转移到收集管中。滤液可以保存在收集管中。
【注】：
● 要达到理想的回收效果，请尽早进行倒置离心。
● 也可不倒置离心，直接用移液器直接吸出内管中的样品。
7.将蛋白浓缩管清洗后用于浓缩其它蛋白样品。
【注】：
● 一般每个蛋白浓缩管重复使用5～10次。
清洗和保存：
1.使用后用水冲洗干净；
2.内管加入超纯水500μL，5000×g离心5分钟；
3.净内管中的水，加入500μL 0.1M NaOH，5000×g离心20分钟；
4.用0.1M NaOH浸泡24小时；
5.用水冲洗干净；
6.用无菌水浸泡2～8℃保存。
7.外管用自来水洗净后，用超纯水冲洗干净，晾干。
【注】：
● 1个月不用的话，直接用100mM的NaOH保存！更长时间的话加0.02%的叠氮钠。
● 再次使用前，用纯水充分冲洗干净，然后在用样品缓冲液平衡。
常见问题分析：
● 蛋白浓缩柱会损失蛋白吗？
分子量小于3000 Da的蛋白质或多肽样品会穿透过滤膜，不适合用本浓缩柱进行浓缩。3000 -6000Da的蛋白质会有少量损失。6000Da以上的蛋白质损失很小。
● 膜会因为离心时间过长而变干么？
不会，因为浓缩柱有死体积，总会有溶液残留在滤管中。死体积大约10～20μL。
● 可以重复使用浓缩柱么？
可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当，可以反复使用多次。但是多次重复使用后过滤膜有破损风险，注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。
● 蛋白在浓缩时出现了沉淀，如何改进？
蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白浓缩后的最终浓度不超过20mg/mL。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白，建议的改进方法是：
1）离心力降低30%～50%
2）在浓缩过程中取出浓缩管，用枪头反复吹吸几次
● 浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
浓缩管的蛋白最低起始浓度为25μg/mL。请确保的样本的起始浓度大于这个浓度。
如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
1）如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
a）使用的离心力是否在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
b）离心机最近是否有校准过？
c）是否首次尝试这个蛋白？如果能确保用同样的浓缩管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果。
2）如果目的样本也不在滤过液中，那么：
a）蛋白样本起始浓度是否大于25μg/mL？
b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
c）目的蛋白是不是沉淀了？
● 有时候用蛋白浓缩离心管连水都离不下来，可能是什么原因？
如果出现这种情况，可能时过滤膜的孔被堵住。请先用0.1M NaOH清洗再离心。
最后用缓冲液或纯水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。
● 说明书中推荐在室温下进行离心，考虑到蛋白的稳定性，是否可以在4℃进行离心？
可以，但是低温会增加蛋白样品的粘性，导致流速减慢，建议可将离心时间延长。
● 浓缩柱可以用酒精消毒灭菌么？
浓缩柱与70%乙醇是兼容的。
● 是否可以用于高压灭菌？
不可以，浓缩柱都是采用热封设计，不可以用高压高温灭菌。
● 是否无热源？
均非无热源的
● 如何对蛋白浓缩管进行去除内毒素的处理？
提供的浓缩管是没有经过去内毒素处理的，同时由于内毒素通常以多聚体的形式存在，大小在10～1000KD之间不等，在浓缩的过程中是无法去除的。可在实验前通过先用0.5M NaOH预清洗，随后用纯水/缓冲液buffer清洗的步骤去除大部分内毒素。
● 是否不含RNA酶？
我们不保证浓缩柱不包含RNA酶，如果需要处理无Rnase样品，建议您可以用0.1% DEPC在37℃浸泡2小时，以完全灭活RNA酶。残留的DEPC可以用无酶超纯水洗涤除去。
● 没有液流流出，为什么？
可能是溶液比较粘稠或浓度太高；
● 蛋白柱去除去垢剂吗？
去垢剂因其独特的性质，当浓度大于临界微团浓度（Critical Micelle Concentration,CMC）时，去垢剂分子会聚集形成微团而改变分子构象，这有可能会影响去污剂的去除效果。小于CMC值时可以去除。
● 如何判断浓缩管已经失效？
在正常使用下，滤膜没有被戳破时，浓缩蛋白液中不含有蛋白或量很低（包括目的蛋白），而第一次的滤下液中含有目的蛋白，则说明滤膜失效，需要换新的浓缩管。
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组分名称50T 100T
组份A：蛋白浓缩管（0.5mL） 5个10个
组份B：套管10个20个
组份C：蛋白吸附抑制剂0.5mL 1mL
保存条件：
室温避光保存，有效期1年。
【注】：
● 浓缩柱配有2个微量离心管。
● 在操作过程中，一个可用于收集滤出液，而另一个用于回收浓缩后的样本。
● 用过的浓缩管要保持过滤膜湿润，不能干掉。
产品说明：
蛋白浓缩试剂盒是采用蛋白浓缩离心管快速浓缩小量蛋白样品的试剂盒。
蛋白浓缩离心管是一种方便的蛋白浓缩工具，只需要离心操作即可以用来对蛋白质液体样本进行浓缩，还可以用于抗原、抗体、酶和微生物的浓缩纯化。也可以用来对蛋白质样品进行缓冲液置换。还可以用来分离蛋白质标记时未结合上的游离标记物。
蛋白浓缩柱使用蛋白质低吸附性的再生纤维素过滤膜制造，具有快速、方便、回收率高的特点，可替代并优于透析法及蛋白沉淀法的蛋白浓缩方法。
应用场景：
● 对稀释或从柱洗脱液预先纯化的蛋白质进行浓缩；
● 组织培养提取物或细胞裂解液中蛋白质组分的纯化；
● 生物样品浓缩：包括各种抗原、抗体、酶、微生物；
● 蛋白质缓冲液更换。
产品特点：
● 高回收率>90%；
● 垂直结构的膜减少了浓差极化，加快离心速度，快达5分钟；
● 热密封膜将下游溶出物污染可能性降到最低；
● 100%完整性检测确保性能可靠；
● 透明外壳和体积刻度方便样品察看；
● 直接吸取样品减少处理步骤；
● 高浓缩倍数：高达80～100倍
产品规格参数：
初始样本的最大体积：500μL
最终浓缩液的典型体积：15～20μL
建议的相对离心力：10000×g（浓缩离心）
1000×g（反转离心）
最大的相对离心力：12000×g
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
● 离心机，可容纳1.5mL微量离心管的固定角度转子离心机● 移液器● 纯水● PBS（pH7.4，1×）
使用注意事项：
● 在操作过程中，一个离心套管可用于收集滤出液，而另一个用于回收浓缩后的样本。
● 用过的浓缩管要保持过滤膜湿润，不能干掉。
清洗浓缩管：
1.用缓冲液或纯水进行预清洗。也可先用0.1M NaOH清洗，再用缓冲液或纯水进行二次清洗。
2.离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用，则让液体保留在滤膜上，直到使用。
蛋白样品处理：
1.在500μL蛋白样品中加入5μL蛋白吸附抑制剂。充分混匀待浓缩。
2.吸附抑制剂按照1/100加到待浓缩蛋白样品。
浓缩使用方法：
使用注意事项：
● 不同的蛋白浓缩的速度不同，有的需要长时间离心，有的则很快就好。和蛋白样品纯度，所用buffer类型，蛋白的浓度有关系。离心时要先短些时间，观察一下浓缩速度；
● 如果需要多次重复使用，离心速度不要太高；
● 重复使用时要仔细检查管壁上有没有裂纹；
● 浓缩柱浓缩蛋白会有蛋白损失，样品体积大就分批离心，尽可能不要离心时间太长
● 样品里的杂质如果可能尽量在离心前去除一些。
● 分子量小于5kD的溶质可能只有部分被截留。2kD的样品截留率大约只有40%。目的蛋白小于5kD的样品不要使用浓缩管法浓缩。
● 浓缩液的样本回收率低可能是由于吸附损失、过度浓缩，或样本穿过滤膜而造成的。
● 吸附损失取决于溶质浓度、疏水性、与过滤浓缩管表面接触的温度和时间、样本成分及pH。为了最大限度降低损失，离心后请立即回收浓缩后的样本。
● 如果样本的起始浓度很高，请监控离心过程，以免样本过度浓缩。过度浓缩会导致沉淀，这也可能带来样本损失。
● 样本有可能穿过滤膜，务必将每次的滤过液一直保留到浓缩的样品分析测试完成。
● 样品蛋白最低起始浓度为25μg/mL。
● 加蛋白液或Buffer到浓缩管时，可以用蓝枪头；但从浓缩管底吸取浓缩好的目的蛋白时，必须用黄枪头；用枪头伸入浓缩管中时，必须防止碰到滤膜，以免戳破滤膜。
操作步骤：
1.将内管插入所提供的一个微量离心管中。
2.向内管中加入不超过500μL的样本，并盖上盖子。
3.将盖好盖子的浓缩管放入离心转子中，让盖子的连接带朝着转子的中央；用一个类似的离心管平衡。
4.以2000～10000×g离心约10～30分钟。
【注】：
● 务必将滤过液一直保留到浓缩的样品分析测试完成。
● 影响流速的因素包括样本浓度、起始体积、溶质的化学性质、相对离心力、离心转子的角度、滤膜类型以及温度。500μL样本的典型离心时间大约是10至30分钟。尽管大部分样本在离心开始后的前5至10分钟发生过滤，但在离心10至30分钟后才能达到最低的浓缩液体积（15～20μL）。
5.离心结束后将整个浓缩管从离心机中取出，取出内管。
6.为了回收浓缩后的溶质，将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中，让打开的盖子朝着转子的中央；用一个类似的离心管进行平衡。以1000×g离心2分钟，使浓缩后的样本从浓缩内管转移到收集管中。滤液可以保存在收集管中。
【注】：
● 要达到理想的回收效果，请尽早进行倒置离心。
● 也可不倒置离心，直接用移液器直接吸出内管中的样品。
7.将蛋白浓缩管清洗后用于浓缩其它蛋白样品。
【注】：
● 一般每个蛋白浓缩管重复使用5～10次。
清洗和保存：
1.使用后用水冲洗干净；
2.内管加入超纯水500μL，5000×g离心5分钟；
3.净内管中的水，加入500μL 0.1M NaOH，5000×g离心20分钟；
4.用0.1M NaOH浸泡24小时；
5.用水冲洗干净；
6.用无菌水浸泡2～8℃保存。
7.外管用自来水洗净后，用超纯水冲洗干净，晾干。
【注】：
● 1个月不用的话，直接用100mM的NaOH保存！更长时间的话加0.02%的叠氮钠。
● 再次使用前，用纯水充分冲洗干净，然后在用样品缓冲液平衡。
常见问题分析：
● 蛋白浓缩柱会损失蛋白吗？
分子量小于3000 Da的蛋白质或多肽样品会穿透过滤膜，不适合用本浓缩柱进行浓缩。3000 -6000Da的蛋白质会有少量损失。6000Da以上的蛋白质损失很小。
● 膜会因为离心时间过长而变干么？
不会，因为浓缩柱有死体积，总会有溶液残留在滤管中。死体积大约10～20μL。
● 可以重复使用浓缩柱么？
可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当，可以反复使用多次。但是多次重复使用后过滤膜有破损风险，注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。
● 蛋白在浓缩时出现了沉淀，如何改进？
蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白浓缩后的最终浓度不超过20mg/mL。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白，建议的改进方法是：
1）离心力降低30%～50%
2）在浓缩过程中取出浓缩管，用枪头反复吹吸几次
● 浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
浓缩管的蛋白最低起始浓度为25μg/mL。请确保的样本的起始浓度大于这个浓度。
如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
1）如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
a）使用的离心力是否在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
b）离心机最近是否有校准过？
c）是否首次尝试这个蛋白？如果能确保用同样的浓缩管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果。
2）如果目的样本也不在滤过液中，那么：
a）蛋白样本起始浓度是否大于25μg/mL？
b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
c）目的蛋白是不是沉淀了？
● 有时候用蛋白浓缩离心管连水都离不下来，可能是什么原因？
如果出现这种情况，可能时过滤膜的孔被堵住。请先用0.1M NaOH清洗再离心。
最后用缓冲液或纯水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。
● 说明书中推荐在室温下进行离心，考虑到蛋白的稳定性，是否可以在4℃进行离心？
可以，但是低温会增加蛋白样品的粘性，导致流速减慢，建议可将离心时间延长。
● 浓缩柱可以用酒精消毒灭菌么？
浓缩柱与70%乙醇是兼容的。
● 是否可以用于高压灭菌？
不可以，浓缩柱都是采用热封设计，不可以用高压高温灭菌。
● 是否无热源？
均非无热源的
● 如何对蛋白浓缩管进行去除内毒素的处理？
提供的浓缩管是没有经过去内毒素处理的，同时由于内毒素通常以多聚体的形式存在，大小在10～1000KD之间不等，在浓缩的过程中是无法去除的。可在实验前通过先用0.5M NaOH预清洗，随后用纯水/缓冲液buffer清洗的步骤去除大部分内毒素。
● 是否不含RNA酶？
我们不保证浓缩柱不包含RNA酶，如果需要处理无Rnase样品，建议您可以用0.1% DEPC在37℃浸泡2小时，以完全灭活RNA酶。残留的DEPC可以用无酶超纯水洗涤除去。
● 没有液流流出，为什么？
可能是溶液比较粘稠或浓度太高；
● 蛋白柱去除去垢剂吗？
去垢剂因其独特的性质，当浓度大于临界微团浓度（Critical Micelle Concentration,CMC）时，去垢剂分子会聚集形成微团而改变分子构象，这有可能会影响去污剂的去除效果。小于CMC值时可以去除。
● 如何判断浓缩管已经失效？
在正常使用下，滤膜没有被戳破时，浓缩蛋白液中不含有蛋白或量很低（包括目的蛋白），而第一次的滤下液中含有目的蛋白，则说明滤膜失效，需要换新的浓缩管。
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