产品货号:
HR8105
中文名称:
双缩脲蛋白定量试剂盒
英文名称:
产品规格:
500T|1000T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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双缩脲是一种用于分析蛋白质的方法,双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下,肽键与铜离子结合,生成蓝紫色的化合物,此化合物在540nm的吸光度与肽键的数量呈正比例关系,因此可计算出蛋白质的含量。
双缩脲法测蛋白浓度兼容性亦很好,不受大部分样本中其他成分的影响,但易受铜离子螯合剂的影响。另外,对于血清总蛋白的双缩脲分析,胆红素、脂类、血红蛋白、葡聚糖具有一定干扰作用。
双缩脲法在5~160mg/mL浓度范围内有较好的线性关系。
组分 | 500T | 1000T | 保存 |
组分A:双缩脲试剂A | 100mL | 200mL | 2~8℃ |
组分B:蛋白标准B(BSA) | 40mg | 40mg | 室温 |
组分C:蛋白标准配制液C | 1.5mL | 3mL |
保存:2~8℃,有效期1年。
- 试剂拆封后请尽快使用完!
- 蛋白标准配制成溶液后要-20℃保存。
- 仪器准备:酶标仪或分光光度计、移液器、冰箱、冰盒
- 试剂准备:纯水、生理盐水
- 耗材准备:离心管、吸头、一次性手套、96孔板
- 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
- 蛋白标准粉末溶解于蛋白标准配制液后,即获得蛋白标准原液;该原液中含有防腐剂,不影响后续检测,该蛋白标准原液-20℃长期保存;
- 待测蛋白和蛋白标准加入双缩脲试剂A后,如果发现检测效果不佳,可以室温放置1h或60℃放置15min,颜色会随着时间的延长而不断加深;
- 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加,吸光度或颜色没有明显变化,可能的原因是样品中含有铜离子螯合剂;
- 蛋白浓度低于20mg/mL时,颜色反应呈不明显的蓝色;当大于40mg/mL时,即可呈现明显的蓝紫色反应;
- 本试剂盒的线性范围是5~160mg/mL,样品蛋白浓度应大于1mg/mL,以20mg/mL上为宜;如果需测定低浓度蛋白样品(1mg/mL),请选择BCA法蛋白定量试剂盒(货号:HR0329);
- 本制品反应生成的蓝紫色的化合物的吸光度,与试剂批次、pH值、反应温度有关;因此建议,每次测定都做标准对照;
- 氨基酸和二肽不发生双缩脲反应,三肽、寡肽和多肽与铜离子的双缩脲复合物,呈粉红色-紫红色,与蛋白质的双缩脲反应结果不同;
- 如果没有酶标仪,也可以使用分光光度计测定。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量会显著减少;
- 检测中发现所有孔都呈暗紫色,可能原因是样品中含有还原剂,应适当透析或稀释样品。
- 取0.25mL蛋白标准配制液C或稀释液加入到40mg的蛋白标准B中,充分溶解后配制成蛋白标准溶液(160mg/mL),配制后可立即使用;溶解后的蛋白标准应-20℃保存。也可根据需要进行稀释,如稀释至40mg/mL;
- 将标准品按0、1、2、4、8、12、16、20μL加到96孔板的标准孔,加稀释液补足至20μL;
- 加适当体积待测蛋白样本到96孔板的样品孔中。
- 各孔中加入200μL双缩脲试剂A,室温静置10~15min;
- 测定540nm波长处的吸光值,如无540nm,510~562nm之间的波长也可;
- 根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
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