产品货号:
HR8088
中文名称:
丝状真菌线粒体蛋白提取试剂盒
英文名称:
Reagents for mitochondrial protein extraction from filamentous fungi
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒用简便快速的方法即可在1小时内提取得到线粒体蛋白。
线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化,并通过偶联磷酸化生成ATP,供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。
保存:2~8℃,有效期1年。
涡旋振荡器、移液器、离心机、250目细胞筛
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线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化,并通过偶联磷酸化生成ATP,供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。
组分 | 50T | 100T |
线粒体提取液A | 200mL | 400mL |
线粒体蛋白提取液B | 20mL | 40mL |
蛋白酶抑制剂混合物 | 100μL | 200μL |
保存:2~8℃,有效期1年。
涡旋振荡器、移液器、离心机、250目细胞筛
- 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
- 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
- 取500mg~1g丝状真菌样本,采用以下其中一种方法处理:
- 加入3mL提取液后用匀浆机/Dounce匀浆器匀浆。
- 置于研钵中用液氮研磨,研磨后加入3mL冷的提取液。
- 加入3mL提取液直接置冰上研磨。
- 加入3mL提取液后用匀浆机/Dounce匀浆器匀浆。
- 将匀浆用250目细胞筛或3层纱布或脱脂棉过滤。或者在4℃,100×g力条件下离心1分钟,收集上清,弃沉淀。
- 将滤液700×g离心10分钟,取上清。
- 将上清11000×g离心20分钟。
- 弃上清,留沉淀。
- 每200μL蛋白提取液B中加入1μL蛋白酶抑制剂混合物混匀。用200~400μL蛋白提取液B重悬沉淀,在4℃条件下振荡20分钟,至无明显沉淀。
- 在4℃,14000×g条件下离心15分钟。
- 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到真菌线粒体蛋白。
- 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
注:
● 建议用BCA法进行蛋白定量。
● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
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