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本试剂盒适用于从各种植物细胞和各种实体植物组织，如叶片、根、种子等植物组织中提取内质网。提取过程简单方便，制备的内质网蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。

本试剂盒采用非酶法提取，提取过程简单方便，速度快，可在2小时内完成，而且绝少交叉污染，但是细胞内质网回收率相比酶法较低。酶法提取制备的植物内质网，回收率稍有提高，但是耗时较长。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒（相关产品HR8196）。请根据实际需要选择试剂盒。

如果实验室没有合适的离心机，可以选择植物内质网提取试剂盒（低速离心法），只需要达到20000×g以内的离心力即可提取内质网蛋白，一般的常规台式离心机均可以满足使用要求。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 如果需要回收所有光面内质网小泡，最后一个离心步骤的离心力需要提高到100000×g力。

• 取新鲜植物叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。取200～500mg植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎。
  
• 加入1～2mL提取液A用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
  注：
  ● 匀浆尽可能充分。至无明显可见固体。
  ● 培养细胞直接收集细胞后用Dounce匀浆器匀浆，匀浆后加提取液A混匀后直接进行以下步骤离心。
  ● 处理叶片等组织样本如果没有匀浆机，也可先加少量提取液A后用Dounce匀浆器充分匀浆后再加提取液A混匀。
  
• 在匀浆液中加入1mL PBS，充分混匀，然后将匀浆液用100μm细胞筛过滤。
  注：
  ● 没有细胞筛时可以不过滤，将匀浆液在4℃静置1分钟，待大的粗纤维，成团组织块等没有破碎的组织块自然沉降，吸取上清。或者以低于100×g力条件下离心1分钟，收集细胞上清，弃组织沉淀。
  ● 部分黏液较多的植物样本可能难以吸取，可以将1mL吸头的口剪掉一点再吸。
  
• 将滤液在200×g条件下离心3分钟，弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在500×g离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
  
• 在1000×g条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
  
• 在3000×g离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清11000×g离心20分钟。弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在4℃,30000×g～50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，收集沉淀。
  注：
  ● 如果条件允许，可将离心力加大到100000×g，有利于提高内质网小泡回收率。
  ● 如果用大的离心转头，液体量太少不好离心的话，可以添加PBS增加液体量。
  
• 在沉淀中加入400μL冷的试剂B，混匀。
  
• 在4℃,30000×g～50000×g力条件下离心45分钟。
  注：
  ● 如果条件允许，可将离心力加大到100000×g，有利于提高内质网小泡回收率。
  ● 如果用大的离心转头，液体量太少不好离心的话，可以添加PBS增加液体量。
  
• 弃上清，沉淀即为内质网。
  
• 用合适的缓冲液重悬内质网，置冰箱备用或直接用于下游实验。

• 内质网蛋白浓度低？
  植物内质网蛋白丰度比较低，在条件允许的情况下，尽可能增加样本量。
  处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当增加试剂A的匀浆次数，并适当延长试剂A和B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 提取的内质网具有活性吗？
  本试剂盒提取的内质网均保持其天然结构和活性。