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本产品是一种基于化学方法的高产跨膜蛋白提取试剂盒。植物跨膜蛋白提取试剂盒可以从各种植物样本中提取跨膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及跨膜蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯合层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，需要除盐后再用于2D电泳。如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒（HR0177）。

• 将蛋白提取的时间缩短至1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 每500μL提取液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  
• 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的100～200mg植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎。
  
• 加入500μL提取液A，用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
  注：
  ● 也可以用液氮研磨处理后加入提取液A。
  ● 没有液氮研磨条件也可以直接加入冷的提取液A在冰上研磨处理。
  ● 如果组织样品很细小，可以剪碎后直接加入提取液2～8℃振荡，可以不用匀浆器。
  
• 将匀浆移入另一个预冷的干净离心管中在2～8℃条件下振荡1～2小时。
  注：
  ● 如果没有2～8℃持续振荡条件，也可直接置2～8℃静置1～2小时，中间每隔10分钟涡旋振荡混匀即可。
  
• 将提取液在2～8℃低温下10000×g离心5分钟，取上清。
  
• 在上清中加入5μL提取液B，充分混匀。
  
• 在37℃水浴10分钟。
  
• 在37℃ 1000×g离心3分钟。
  注：
  ● 此步骤必须37℃条件下离心。
  ● 如果离心机不可温控，可以不离心，延长上一步骤水浴时间，至溶液分层清晰即可。或者在室温条件下离心，缩短离心时间至1分钟。
  
• 此时溶液分为两层，小心移除上层，留着管底部下层大约30～50μL液体。
  注：
  ● 下层为粘稠状液体。
  ● 含叶绿体的植物样本下层跨膜蛋白为黄绿色。通常不影响下游应用。
  ● 如果需要去除其中的叶绿素，可以联系我们购买叶绿素去除试剂。
  
• 用50～150μL冷的膜蛋白溶解液C溶解下层溶液，即得跨膜蛋白样品。
  注：
  ● 膜蛋白如果不能很快溶解混匀，可以在加入溶解液后稍微吹打混匀，然后置于4℃冰箱静置10分钟。静置后取出再次用移液器稍微吹打混匀即可。
  ● 如果4℃静置10分钟后仍未有效混匀，可以稍微延长静置时间。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 蛋白浓度低？
  跨膜蛋白丰度较低，需要尽可能加大细胞上样量。处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。