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本试剂盒适用于从各种菌体包括革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌中高效而温和地抽提总蛋白。提取过程简单方便。含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份。含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒的蛋白提取组分中不含有不可透析除去的去垢剂组分，不含有SDS、Triton X-100、chaps等可能影响质谱实验的组分，最后得到的蛋白质样品经过透析或者除盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响，基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。

本产品的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移，因此使用本产品提取的蛋白可用于质谱(Mass Spectrometry)检测和分析，蛋白质组学(proteomics)等相关研究。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白也可用于WB、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

• 使用方便，从细胞、组织中提取蛋白不需要经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可抑制几乎所有重要蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 蛋白提取液A2、蛋白酶抑制剂尚未开盖使用前也可2～8℃保存，开盖后-20℃。避免反复冻融。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 螺旋离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有实际需预冷，所有器具须放-20℃冰箱预冷，整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其他蛋白酶抑制剂单品。
  
• 离心机转速有相对离心力(RCF,×g)和每分钟转速(RPM)两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
  g=r×1.118×10^-5×rpm²(r为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米)
  例如：转速为3000rpm，有效离心半径为10cm，则相对离心力(RCF,×g)为10×1.118×10^-5×3000²=1006.2(×g)。

• 提取液准备：
  将试剂A1和试剂A2混合，配成蛋白提取液A，充分混匀备用。
  每500μL蛋白提取液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  ● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
  
• 在4℃，10000×g条件下将菌液离心5min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。
  
• 用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
  
• 按每50～100mg湿重菌体样本加入500μL蛋白提取液A，吹打混匀，2～8℃振荡20～30分钟。
  注：
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，保证提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
  ● 本试剂盒试剂组分中不含溶菌酶等，对革兰氏阳性菌等细胞壁较厚的微生物裂解效果较差，可以根据下游应用选择是否能用溶菌酶处理。不能使用溶菌酶可以按下步的超声处理。
  
• 在150w-300w，10s超声/10s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。
  注：
  ● 此步可以选做，没有超声条件的话可以不超声，延长上步骤振荡时间即可，至菌体充分裂解。
  ● 超声时间尽量短，提取液变清即可，一般不超过20分钟。
  ● 如果超声时出现黑色沉淀，说明超声功率过大，需要降低功率。避免产生泡沫。
  
• 在4℃，12000×g条件下将菌液离心10分钟，将上清移入冷干净离心管。即得到细菌总蛋白样品。
  
• 将蛋白样品透析处理或脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。
  注：
  ● 蛋白样品中含有盐，需要脱盐处理后用于双向电泳。
  ● 经透析或脱盐离心柱处理的蛋白样品不含有去垢剂和高浓度盐。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 蛋白浓度低？
  处理部分样本可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法，或者Bradford法。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。