产品货号:
HR0389
中文名称:
蛋白脱盐柱
英文名称:
产品规格:
0.5mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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蛋白脱盐柱是一种方便的蛋白脱盐工具,只需离心操作即可用来对蛋白质液体样本进行脱盐,还可用于蛋白质、抗原、抗体、酶和微生物的浓缩纯化。也可以用来对蛋白质样品中的盐分、糖类、核酸、非水溶剂及其他一些低分子量物质进行去除和缓冲液置换。还可以用来分离蛋白质标记时未结合上的游离标记物。
蛋白脱盐柱使用蛋白质低吸附性的再生纤维素过滤膜制造,具有快速、方便、回收率高的特点,可替代并优于透析法脱盐及蛋白沉淀法蛋白浓缩。
- 脱盐和缓冲液更换;
- 组织培养提取物或细胞裂解液中大分子组分的纯化;
- 生物样品浓缩:包括各种抗原、抗体、酶、核酸或微生物;
- 对稀释或从柱洗脱液预先纯化的蛋白质进行浓缩。
- 高回收率:>90%;
- 垂直结构的膜减少了浓差极化,加快离心速度,快达5分钟;
- 热密封膜将下游溶出物污染可能性降到最低;
- 100%完整性检测确保性能可靠;
- 透明外壳和体积刻度方便样品察看;
- 直接吸取样品减少处理步骤。
离心机(可容纳1.5mL微量离心管的固定角度转子离心机)、振荡器、移液器、纯水
蛋白质溶质 | 蛋白质截留物体积,ml | 蛋白质截留物,回收率,% |
细胞色素C,12,400Da(0.25mg/mL) | 0.019 | 98.7 |
注:0.5mL起始量,固定角度转子,5000×g,25℃。离心时间:30min |
初始样本的最大体积 | 500μL |
最终浓缩液的典型体积 | 15~20μL |
建议的相对离心力 | 10000×g(脱盐离心) 1000×g(反转离心) |
最大的相对离心力 | 12000×g |
有效膜面积 | 1cm2 |
截留体积 | <5μL |
尺寸: | |
过滤管和管子 | 长度(脱盐模式;脱盐管插在管中):49.9mm 长度(反转离心;脱盐管倒着插在管中):47.4mm |
管(已盖上盖子) | 直径:10.8mm;长度:42.1mm |
过滤脱盐管 | 直径:9.4mm;长度:29.5mm |
脱盐管材料: | |
过滤脱盐管 | 苯乙烯共聚物/丁二烯 |
滤膜 | 低蛋白结合再生纤维素膜 |
收集管 | 聚丙烯 |
离心脱盐管适用于生物液体和水溶液。
在使用前,请检查样本是否符合脱盐管的化学相容性。
试剂 | 浓度 | 试剂 | 浓度 |
乙酸 | 50% | 磷酸 | 30% |
甲酸 | 5% | 氨基磺酸 | 3% |
盐酸 | 1.0M | 硫酸 | 3% |
乳酸 | 3% | 三氯乙酸 | 10% |
硝酸 | 50% | 三氟乙酸 | 30% |
氢氧化铵 | 10% | 氢氧化钠 | 0.5M |
正丁醇 | 70% | 异丙醇 | 70% |
乙醇 | 70% | 甲醇 | 60% |
CHAPS | 0.1% | 脱氧胆酸钠 | 5% |
SDS | 0.1% | NP-40 | 2% |
Triton X100 | 0.1% | Tween20 | 0.1% |
硫酸铵 | 饱和 | 焦碳酸二乙酯 | 0.2% |
DTT | 0.1M | 丙三醇 | 70% |
盐酸胍 | 6M | 咪唑 | 100mM |
巯基乙醇 | 0.1M | 磷酸盐缓冲液 | 1M |
聚乙二醇 | 10% | 碳酸钠 | 20% |
Tris缓冲液 | 1M | 尿素 | 8M |
苯酚 | 1% | ||
丙酮、乙腈、苯、四氯化碳、氯仿、二甲基亚砜、 乙酸乙酯、甲醛、吡啶、四氢呋喃、甲苯 | 不能使用 |
- 预实验很重要。必须要做预实验,在正式实验之前取少量样本优化实验条件,并像正式样本一样认真进行,看实验结果是否可行,实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性,不同样本的实验条件通常差异较大,同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同,为了避免浪费正式样本和试剂,一定要提前预实验优化实验条件。
- 盐分通过滤膜的过程不依赖样品的浓度和体积,用过滤的方法来脱盐并不改变缓冲液的组成,比如说,含有500mM盐分的溶液在第一次离心后它的剩余液体盐浓度并不发生改变,依然是500mM。再往脱盐管中剩余溶液中加入水或无盐缓冲液,再次离心,则会降低溶液中的盐浓度。
- 这个过程我们将它称为等体积过滤,反复多次地操作,可以使溶液盐分降到最低。
- 如果我们想将样品用不同组份缓冲液溶解,则我们可以使用等体积过滤达到目的。样品脱盐后,然后加入目的缓冲液,再进行反复的稀释和脱盐。
- 不同的蛋白脱盐的速度不同,有的需要长时间离心,有的则很快就好。和蛋白样品纯度,所用buffer类型,蛋白的浓度有关系。离心时要先短些时间,观察一下脱盐速度;
- 如果需要多次重复使用,离心速度不要太高;
- 重复使用时要仔细检查管壁上有没有裂纹;
- 脱盐柱浓缩蛋白会有蛋白损失,样品体积大就分批离心,尽可能不要离心时间太长。
- 样品里的杂质如果可能尽量在离心前去除一些。
- 分子量小于5kD的溶质可能只有部分被截留。2kD的样品截留率大约只有40%。过滤膜的截留率取决于溶质的分子大小和形状。目的蛋白小于5kD的样品不要使用脱盐柱脱盐。
- 浓缩液的样本回收率低可能是由于吸附损失、过度浓缩,或样本穿过滤膜而造成的。
- 吸附损失取决于溶质浓度、疏水性、与过滤脱盐管表面接触的温度和时间、样本成分及pH。为了最大限度降低损失,离心后请立即回收脱盐后的样本。
- 如果样本的起始浓度很高,请监控离心过程,以免样本过度浓缩。过度浓缩会导致沉淀,这也可能带来样本损失。
- 样本有可能穿过滤膜,务必将每次的滤过液一直保留到脱盐的样品分析测试完成。
- 样品蛋白最低起始浓度为25μg/mL。
- 加蛋白液或Buffer到脱盐管时,可以用蓝枪头;但从脱盐管底吸取脱盐好的目的蛋白时,必须用黄枪头;用枪头伸入脱盐管中时,必须防止碰到滤膜,以免戳破滤膜。
- 离心机转速有相对离心力(RCF,×g)和每分钟转速(RPM)两种表示方式,有些离心机设置有RPM和×g显示切换,但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算:
G=r×1.118×10-5×rpm2(r为有效离心半径,即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度,单位为厘米)
例如:转速为3000rpm,有效离心半径为10cm,则相对离心力(RCF,×g)为=10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。
- 清洗脱盐柱:
- 用缓冲液或纯水进行预清洗。也可先用0.1M NaOH清洗,再用缓冲液或纯水进行二次清洗。
- 离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用,则让液体保留在滤膜上,直到使用。
- 用缓冲液或纯水进行预清洗。也可先用0.1M NaOH清洗,再用缓冲液或纯水进行二次清洗。
- 脱盐操作步骤:
- 将内管插入所提供的一个微量离心管中。
- 向内管中加入不超过500μL的样本,并盖上盖子。
注:如果样品体积小于过滤装置的最大体积,则可以把它稀释到最大体积后再离心,这有助于更有效地除去盐分。 - 将盖好盖子的脱盐管放入离心转子中,让盖子的连接带朝着转子的中央;用一个类似的离心管平衡。
- 以2000~10000×g离心约10~30分钟。
注:
● 务必将滤过液一直保留到脱盐的样品分析测试完成。
● 影响流速的因素包括样本浓度、起始体积、溶质的化学性质、相对离心力、离心转子的角度、滤膜类型以及温度。500μL样本的典型离心时间大约是10至30分钟。尽管大部分样本在离心开始后的前5至10分钟发生过滤,但在离心10至30分钟后才能达到最低的浓缩液体积(15~20μL)。 - 加入水或待更换缓冲液使样品体积达到0.5mL。
- 再次离心。
注:
● 务必将滤过液一直保留到脱盐的样品分析测试完成。
● 请将两次的滤过液一直保留到脱盐的样品分析测试完成。 - 离心结束后将整个脱盐管从离心机中取出,取出内管。
- 为了回收脱盐后的溶质,将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中,让打开的盖子朝着转子的中央;用一个类似的离心管进行平衡。以1000×g离心2分钟,使脱盐后的样本从脱盐内管转移到收集管中。滤液可以保存在收集管中。
注:
● 要达到理想的回收效果,请尽早进行倒置离心。
● 也可不倒置离心,直接用移液器直接吸出内管中的样品。
- 将内管插入所提供的一个微量离心管中。
- 清洗和保存:
- 使用后用水冲洗干净;
- 内管加入超纯水500μL,5000×g离心5分钟;
- 净内管中的水,加入500μL 0.1M NaOH,5000×g离心20分钟;
- 用0.1M NaOH浸泡24小时;
- 用水冲洗干净;
- 用无菌水浸泡2~8℃保存。
- 外管用自来水洗净后,用超纯水冲洗干净,晾干。
注:
● 1个月不用的话,直接用100mM的NaOH保存!更长时间的话加0.02%叠氮钠。
● 再次使用前,用纯水充分冲洗干净,然后在用样品缓冲液平衡。
- 使用后用水冲洗干净;
- 蛋白脱盐柱会损失蛋白吗?
分子量小于3000 Da的蛋白质或多肽样品会穿透过滤膜,不适合用本脱盐柱进行脱盐。3000-6000Da的蛋白质会有少量损失。6000Da以上的蛋白质损失很小。 - 膜会因为离心时间过长而变干么?
不会,因为脱盐柱有死体积,总会有溶液残留在滤管中。死体积大约10~20μL。 - 可以重复使用脱盐柱么?
可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当,可以反复使用多次。但是多次重复使用后过滤膜有破损风险,注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。 - 蛋白在脱盐时出现了沉淀,如何改进?
蛋白如果脱盐过快或过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白脱盐后的最终浓度不超过20mg/mL。对于对脱盐速度敏感而容易沉淀的蛋白,建议的改进方法是:- 离心力降低30%~50%
- 在脱盐过程中取出脱盐管,用枪头反复吹吸几次。
- 离心力降低30%~50%
- 脱盐后发现浓缩液中没有目的蛋白,可能的原因有哪些?
脱盐管的蛋白最低起始浓度为25μg/mL。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。
如果问题仍然出现,请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因:- 如果目的样本在滤过液中,那么请排查:
- 使用的离心力是否是在限定范围内?如果使用的是rpm,请换算成相应的g离心力,具体换算方法请垂询。
- 离心机最近是否有校准过?
- 是否首次尝试这个蛋白?如果能确保用同样的脱盐管对其它蛋白成功操作的话,那么有可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性(构象差异)而影响脱盐效果。
- 使用的离心力是否是在限定范围内?如果使用的是rpm,请换算成相应的g离心力,具体换算方法请垂询。
- 如果目的样本也不在滤过液中,那么:
- 蛋白样本起始浓度是否大于25μg/mL?
- 用来确定样本浓度的方法是什么?是否可信?
- 目的蛋白是不是沉淀了?
- 蛋白样本起始浓度是否大于25μg/mL?
- 如果目的样本在滤过液中,那么请排查:
- 有时候用蛋白脱盐离心管连水都离不下来,可能是什么原因?
如果出现这种情况,可能时过滤膜的孔被堵住。请先用0.1M NaOH清洗再离心。
最后用缓冲液或纯水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用,如暂时不用,请保持润湿状态,避免重新干燥。 - 推荐在室温下进行离心,考虑到蛋白的稳定性,是否可以在4℃进行离心?
可以,但是低温会增加蛋白样品的粘性,导致流速减慢,建议可将离心时间延长。 - 可以用于核苷酸纯化与浓缩么?
可以 - 脱盐柱可以用酒精消毒灭菌么?
脱盐柱与70%乙醇是兼容的。 - 是否可以用于高压灭菌?
不可以,脱盐柱都是采用热封设计,不可以用高压高温灭菌。 - 是否无热源?
均非无热源的 - 如何对蛋白脱盐管进行去除内毒素的处理?
提供的脱盐管是没有经过去内毒素处理的,同时由于内毒素通常以多聚体的形式存在,大小在10~1000KD之间不等,在脱盐的过程中是无法去除的。可在实验前通过先用0.5M NaOH预清洗,随后用纯水/缓冲液buffer清洗的步骤去除大部分内毒素。 - 是否不含RNA酶?
我们不保证脱盐柱不包含RNA酶,如果需要处理无Rnase样品,建议您可以用0.1% DEPC在37℃浸泡2小时,以完全灭活RNA酶。残留的DEPC可以用无酶超纯水洗涤除去。 - 没有液流流出,为什么?
可能是溶液比较粘稠或浓度太高; - 蛋白柱去除去垢剂吗?
去垢剂因其独特的性质,当浓度大于临界微团浓度(Critical Micelle Concentration,CMC)时,去垢剂分子会聚集形成微团而改变分子构象,这有可能会影响去污剂的去除效果。小于CMC值时可以去除。 - 如何判断脱盐管已经失效?
在正常使用下,滤膜没有被戳破时,脱盐蛋白液中不含有蛋白或量很低(包括目的蛋白),而第一次的滤下液中含有目的蛋白,则说明滤膜失效,需要换新的脱盐管。
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