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Bradford法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一。当Bradford染色液（考马斯亮蓝G250）和蛋白在酸性条件下结合时，溶液颜色由棕黑色转为蓝色，最大吸光值波长由456nm转至595nm，吸光值与蛋白质的含量在一定浓度范围内有较好的线性关系，通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值，推算出蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速，稳定和高灵敏度。

Bradford法测定受样品中去垢剂的影响，如果蛋白样品中含有高浓度的去垢剂，可以选用BCA法的试剂盒。

BCA法快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小。BCA法测定蛋白浓度不受绝大样品中的化学物质的影响。在组织细胞蛋白提取过程中，常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂（EDTA，EGTA）、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。

• Bradford法对于去污剂敏感的，受高浓度去垢剂影响。需确保SDS低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20,60,80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用我公司的BCA蛋白浓度测定试剂盒。
  
• 染色液使用前请混匀。
  
• 将G250染色液放置到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。
  
• 由于Bradford法在蛋白浓度增高到一定时候，颜色反应并不成比例增加，因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线，每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对精确的蛋白浓度。
  
• 反应在5分钟后显色充分，但在10分钟后可能开始出现沉淀，故建议在加入染色液后5～10分钟内完成检测，误差较小。
  
• 最好使用塑料比色皿，如使用玻璃比色皿或石英比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇清洗。

• 96孔酶标板测定
  
  • 蛋白标准工作液配制：
    根据样品数量配制相应体积的蛋白标准工作液。将蛋白标准储存液用双蒸水5倍稀释，配成1mg/mL的工作液。
    
  • 标准曲线绘制。
    取一块酶标板，按以下表格数据加入试剂：
    

    孔号	0	1	2	3	4	5	6
    蛋白标准（μL）	0	1	2	4	6	8	10
    纯水（μL）	100	99	98	96	94	92	90
    2×Bradford染色液（μL）	100	100	100	100	100	100	100
    对应的蛋白含量（μg）	0	1	2	4	6	8	10

    
    
  • 振荡混匀后，室温放置5～10分钟。
    
  • 用酶标仪测定A595，以不含BSA的光吸收值为空白对照。
    
  • 以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
    
  • 样品测定：
    将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度，取10μL样品，加入100μL 2×Bradford染色液和90μL的纯水，混匀后放置5～10分钟，然后以0号孔为对照，测定样品吸收值A595。
    
    • 必须用纯水补足体积，不能用PBS等buffer。
  • 根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。
    
  • 计算蛋白浓度：
    以查得的蛋白含量除以样品体积10μL，再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。
• 比色皿测定
  按照比色皿规格，与以上方法相同，适当按比例增加各溶液体积即可。