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本试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取线粒体蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便。制备的线粒体蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于WesternBlotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。本试剂盒提取的蛋白不可用于2D电泳。如下游实验需要用于2D电泳，请使用货号HR0191的试剂盒。

• 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
  
• 最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通1mL玻璃匀浆器匀浆也可。也可采用超声破碎的方法，建议功率30w，10s。采用普通匀浆器或超声破碎，建议镜检，保证细胞80%以上的破碎率。
  
• 每200μL试剂C和试剂D加入2μL蛋白酶抑制剂混合物混匀备用。

• 取1～2×10⁷个细胞，在4℃，500×g条件下离心2～3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
  注：细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
  
• 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
  
• 加入200μL冷的试剂A，置冰上10分钟。
  
• Dounce匀浆器匀浆30～40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。
  
• 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
  
• 在4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
  
• 取步骤6的上清于另一干净离心管中，加入200μL试剂C混匀，在4℃，11000×g以上条件下离心5分钟，取上清，即得胞浆蛋白。
  
• 在步骤6的沉淀中加入200μL冷的试剂B，混匀。
  
• 在4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
  
• 弃上清。
  
• 在沉淀中加入80μL～150μL试剂D，置冰上20分钟，每隔5分钟高速涡旋振荡15秒。
  
• 即得线粒体蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。