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本试剂盒适用于从各种植物细胞和各种实体植物组织，如叶片、根、种子等植物组织中提取核蛋白和其它细胞质蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解植物核组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品HR0389）。

本试剂盒采用非酶法提取，提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，而且绝少交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法较低。酶法提取制备的蛋白，回收率稍有提高，蛋白纯度高，保持天然活性，但是耗时较长。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒（相关产品HR8062）。请根据实际需要选择试剂盒。

• 将蛋白提取的时间缩短至1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
  
• 离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
  g=r×1.118×10^-5×rpm² （r为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米)
  例如:转速为3000rpm，有效离心半径为10cm，则相对离心力(RCF,×g)=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2(×g)。

• 提取液制备：
  每500μL冷的蛋白提取液A中加入1μL蛋白酶抑制剂；每200μL蛋白提取液B中分别加入1μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  
• 取200～500mg新鲜植物叶片，用PBS或纯水洗净擦干后去除叶梗和粗脉，用手术剪刀尽可能剪碎。
  
• 加入500μL～1000μL提取液A后用匀浆机充分匀浆或匀浆器充分匀浆。
  注：
  ● 匀浆尽可能充分。至无明显可见固体。
  ● 培养细胞直接收集细胞后用匀浆器匀浆即可，匀浆后加提取液A混匀后直接进行以下步骤离心。
  ● 处理叶片等组织样本如没有匀浆机，也可先加少量提取液A后用匀浆器充分匀浆再加提取液A混匀。
  
• 将匀浆用100μm细胞筛过滤。
  注：
  ● 没有细胞筛时可以不过滤，将匀浆液静置1分钟，待大的没有破碎的组织块自然沉降，吸取上清。
  ● 部分黏液较多的植物样本可能难以吸取，可以将1mL吸头的口剪掉一点再吸。
  
• 将滤液在4℃，800×g力条件下离心5分钟。
  
• 收集沉淀（I），将上清（I）移入另一干净的离心管。
  
• 在沉淀（I）中加入100～200μL冷的提取液B，高速涡旋5秒，充分混匀。
  
• 置4℃振荡20～40分钟。
  注：
  ● 用振荡器/摇床的较低转速，保持液体稍微有晃动即可。
  ● 无低温振荡条件可不振荡，在2～8℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
  
• 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到核蛋白。
  
• 在步骤6中的上清（I）中加入50μL胞质提取液C，高速涡旋振荡10秒，充分混匀。
  
• 置4℃振荡5分钟。
  
• 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到细胞质蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 蛋白浓度低？
  植物核蛋白丰度比较低，在条件允许的情况下，尽可能增加样本量。
  处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当增加试剂A的匀浆次数，并适当延长试剂B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取时出现胶状沉淀？
  蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。