
产品货号:
HR0127
中文名称:
固定细胞蛋白提取试剂盒
英文名称:
Fixed cell protein extraction kit
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒适用于从各种固定的细胞样本中提取总蛋白,适用于乙醇固定、甲醛固定、多聚甲醛固定、其它混合固定液固定的细胞样本。提取过程简单方便,提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

组分 | 50T | 100T |
蛋白提取液A | 25mL | 50mL |
蛋白提取液B | 250μL | 500μL |
保存:室温,有效期1年。

仪器准备 | 离心机、振荡器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒 |
试剂准备 | 1×PBS缓冲液(pH7.4,8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)、蛋白定量试剂盒 |
耗材准备 | 离心管、吸头、一次性手套 |

- 有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期,试剂拆封后请尽快使用完!
- 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。

- 提取液制备:
每500μL蛋白提取液中加入5μL蛋白提取液B,混匀后备用。- 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的提取液。
- 每1×107个细胞中加入500μL蛋白提取液,涡旋振荡10秒。
- 在恒温器(Heat Block)或水浴锅中100℃保温20分钟。
- 涡旋振荡10秒混匀。
- 在恒温器(Heat Block)或水浴锅中60℃保温1~2小时。
- 中途每30分钟用移液器吹打混匀。
- 涡旋振荡10秒混匀。
- 在12000×g条件下离心10分钟。
- 将上清吸入另一干净离心管,即可得到总蛋白。
- 将上述蛋白提取物定量后分装保存备用或直接用于下游实验。
- 组织量根据实验情况调整,每次的裂解液用量并不是一定的,大约样本体积的3~5倍即可,请根据实际情况调整。
- 建议用BCA法进行蛋白定量。
- 组织量根据实验情况调整,每次的裂解液用量并不是一定的,大约样本体积的3~5倍即可,请根据实际情况调整。

- 蛋白浓度低?
固定的细胞组织的蛋白质回收率较低,甲醛固定样本回收率在30%左右。需要加大细胞组织样本上样量,调整提取液用量来调整蛋白浓度。 - WB做不出来?
固定样本的蛋白质回收率在30%左右。低丰度蛋白通常较难检出。
甲醛固定的蛋白质末端基团与甲醛之间形成交联链,各种氨基,亚氨基及酰氨基,肽,胍基,羟基,SH和芳香环等都会参与甲醛固定蛋白质的基团反应,在这个过程中,绝大部分常规的暴露抗原决定基团遭到破坏,从甲醛固定样本回收的蛋白质做WB成功的概率较低,最好选用抗体说明书上同时可以做WB和IHC的抗体。
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