产品货号:
HR0125
中文名称:
甲醛固定组织蛋白提取试剂盒
英文名称:
Formaldehyde fixed tissue protein extraction kit
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒适用于从各种经甲醛固定的组织样本中提取总蛋白,提取过程简单方便,提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。
本试剂盒提取的蛋白含有高浓度的盐成分,不可直接用于2D电泳,如下游实验需要直接用于等点聚集、双向电泳,请使用我公司其他货号的试剂盒,也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳,用脱盐柱脱盐处理。
组分 | 50T | 100T |
组分A:蛋白提取液A | 25mL | 50mL |
组分B:蛋白提取液B | 250μL | 500μL |
保存:室温,有效期1年。
移液器、离心机、涡旋混匀器、振荡器、恒温器/水浴锅
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
- 提取液制备:
每500μL蛋白提取液中加入5μL蛋白提取液B,混匀后备用。 - 将组织样品用手术剪刀剪碎,每100mg样本中加入500μL蛋白提取液,涡旋振荡10秒。
注:
● 样本较小时直接加入蛋白提取液。
● 有匀浆条件的话,组织加入蛋白提取液后进行充分匀浆。 - 在恒温器(Heat Block)或水浴锅中100℃保温20分钟。
- 涡旋振荡10秒混匀。
- 在恒温器(Heat Block)或水浴锅中60℃保温1~2小时。
注:中途每30分钟用移液器吹打混匀。 - 涡旋振荡10秒混匀。
- 在12000×g条件下离心15分钟。
- 将上清吸入另一干净离心管,即可得到总蛋白。
- 将上述蛋白提取物定量后分装保存备用或直接用于下游实验。
注:
● 组织量根据实验情况调整,每次的裂解液用量并不是一定的,大约样本体积的3~5倍即可,请根据实际情况调整。
● 建议用BCA法进行蛋白定量。
- 蛋白浓度低?
固定组织的蛋白质回收率在30%左右。
需要加大组织上样量,调整提取液用量来调整蛋白浓度。 - WB做不出来?
固定组织的蛋白质回收率在30%左右,低丰度蛋白通常较难检出。
甲醛固定的蛋白质末端基团与甲醛之间形成交联链,各种氨基,亚氨基及酰胺基,肽,胍基,羟基,SH和芳香环等都会参与甲醛固定蛋白质的基团反应,在这个过程中,绝大部分常规的暴露抗原决定基团遭到破坏,从甲醛固定样本回收的蛋白质做WB成功的概率较低,最好选用抗体说明书上同时可以做WB和IHC的抗体。
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