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本试剂盒适用于从各种脂肪含量高的细胞和实体组织，如脂肪细胞、脂肪肝细胞、脑、脂肪、脂肪肝脏、结缔组织、胸腺组织等动物组织中提取总蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒所配离心柱用来滤除颗粒较大的固体杂质和固态脂肪杂质，不能完全滤除液态脂滴，如果离心过滤后液面有脂肪层，需要用移液器移除液面的脂肪层。需要一次性完全滤除所有液态脂肪请选用我公司其他货号的试剂盒。

• 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
  
• 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。
  
• 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
  
• 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。

• 使用方便，从细胞/组织提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
  
• Western实验内参可以选用beta-actin、GAPDH、Tubulin。

• 细胞蛋白提取：
  
  • 提取液制备：
    每500μL冷的蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物混匀后置冰上备用。
    注：
    ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
    ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
    ● 蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶、磷酸酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。
    
  • 取5～10×10⁶个细胞，在4℃，2000×g条件离心5～10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
    
  • 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
    
  • 每5×10⁶个细胞中加入500μL冷的蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15～20分钟。
    注：
    ● 用振荡器/摇床的较低转速，保持液体稍微晃动即可。
    ● 没有振荡条件可以不振荡，置4℃静置即可，稍微延长时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
    
  • 套上液体收集管，将提取液吸入蛋白离心管中，在4℃，10000×g条件下离心5分钟。
    注：
    ● 蛋白离心管适用于过滤除去不溶性大颗粒组织固体杂质，固态脂肪等，如果是做脂肪含量低的细胞或无明显固体不溶物时，可以不使用离心柱，直接将匀浆液离心即可。
    ● 提取液液面有脂滴时，可以用移液器小心吸除脂滴即可。
    ● 蛋白液里的微量脂肪需要直接过滤除去，可以使用我们的蛋白去脂肪柱。
    ● 离心前蛋白液会在重力作用下自然流穿离心柱，一定要先套上收集管再吸入蛋白液。
    
  • 将液体收集管中的液体吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。
    
  • 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
    注：
    ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
    ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
• 组织蛋白提取：
  
  • 提取液制备：
    每500μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
    注：
    ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
    ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
    
  • 取100mg～200mg组织样本剪碎，加入500μL蛋白提取液，用组织匀浆器/匀浆机充分匀浆。
    注：
    ● 如果组织样品很细小，可剪碎后直接加入提取液振荡15分钟，可以不用匀浆器。
    ● 也可用液氮研磨的方法，常用操作即可。
    
  • 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡15～30分钟。
    注：
    ● 用振荡器/摇床的较低转速，保持液体稍微晃动即可。
    ● 没有振荡条件可以不振荡，置4℃静置即可，稍微延长时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
    
  • 套上液体收集管，将提取液吸入蛋白离心管中，在4℃，10000×g条件下离心5分钟。
    注：
    ● 蛋白离心管适用于过滤除去不溶性大颗粒组织固体杂质，固态脂肪等，如果是做脂肪含量低的细胞或无明显固体不溶物时，可以不使用离心柱，直接将匀浆液离心即可。
    ● 提取液液面有脂滴时，可以用移液器小心吸除脂滴即可。
    ● 蛋白液里的微量脂肪需要直接过滤除去，可以使用我们的蛋白去脂肪柱。
    ● 离心前蛋白液会在重力作用下自然流穿离心柱，一定要先套上收集管再吸入蛋白液。
    
  • 将液体收集管中的液体吸入另一预冷的干净离心管，在4℃，10000×g条件下离心5分钟。
    
  • 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。
    
  • 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
    注：
    ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
    ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。