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本产品是一种快速高效的高产膜蛋白提取试剂盒。可以从各种大型真菌（蕈菌）中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。提取小型真菌（丝状真菌等）的膜蛋白请选用其他货号试剂盒（相关产品HR8092）。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白可用于WB、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品HR0389）。

• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
  
• 更多蛋白提取常见问题分析等资料可以联系本公司索取。

• 提取液准备：
  每500μL冷提取液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  
• 取100～200mg真菌样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入500μL提取液A后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
  注：
  ● 也可置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入500μL冷的提取液A。
  ● 没有液氮研磨条件，也可加入500μL提取液A直接置冰上研磨。
  
• 在2～8℃持续振荡1～2小时。
  注：
  ● 此步骤必须在2～8℃条件振荡。
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有2～8℃振荡条件也可以不振荡，置2～8℃静置，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
  
• 将提取液在2～8℃下10000×g离心5分钟，取上清。
  
• 在上清中加入5μL抽提液B，充分混匀。
  
• 在37℃水浴10分钟。
  
• 在37℃条件下1000×g离心5分钟。
  注：
  ● 此步骤必须37℃条件下离心。
  ● 如果离心机不可控温，可以不离心，延长上一步骤水浴时间，至溶液逐渐澄清，分层清晰即可。或者在室温条件下离心，缩短离心时间至1分钟。
  
• 此时溶液分为2层，小心移除上层，留下下层管底部大约50μL液体。
  注：
  ● 下层为粘稠状液体。
  ● 有时还没有分层完全时看上去可能像3层，保留中间的界面层即可。
  
• 用1～2倍体积膜蛋白溶解液C溶解该溶液，即得膜蛋白样品。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 蛋白浓度低？
  膜蛋白丰度较低，需要尽可能加大细胞或组织上样量。处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。