产品目录

本试剂盒用于从各种根茎组织样品中提取总蛋白。适用于各种地下茎、地上茎、匍匐茎、鳞茎、变态茎、以及各种肉质根、气根等样本。

本试剂盒不适用淀粉含量高的块根/块茎类样品的蛋白提取，如马铃薯、芋头等。高淀粉含量的样品请选用我公司其他产品号的试剂盒（相关产品HR8040）。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，释放出可溶性蛋白质。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本试剂盒提取的蛋白样本含高浓度盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（HR0389）。

• 使用方便，提取蛋白不需经过反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 总蛋白提取液含多种有效成分，可充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
  
• 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

• 提取液准备：
  每500μL冷的提取液A中加入2μL蛋白酶抑制剂，充分混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  
• 取洗净擦干后的300～500mg鲜嫩植物组织样本，加入500μL提取液A后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
  注：
  ● 也可置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入500μL冷的提取液A。
  ● 没有液氮研磨条件，也可加入500μL提取液A直接置冰上研磨。
  
• 将匀浆液吸入一个预冷的干净离心管中在4℃振荡30分钟～1小时。
  注：
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可不振荡，静置1小时，中间每隔10分钟用移液器吹打混匀一次。
  ● 有些黏液较多的样本可能难以吸取，可以将吸头剪掉一点再吸。
  
• 在4℃，12000×g条件下离心10～15分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
  
• 上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
  ● 有些植物组织样本的蛋白质含量较低，在条件允许的情况下，可以加大组织样品的上样量。
  ● 同一种植物的不同年龄样本的蛋白质含量差异较大，条件允许情况下，应尽可能选用年龄小的样本。
  ● 蛋白质浓度低不利于下游实验应用时，可以对样品进行浓缩。相关产品：HR0388。

• 细胞裂解速度慢？
  为了充分保证提取得到的蛋白活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。
  
• 蛋白浓度低？
  有些植物组织样本的蛋白质含量较低，在条件允许的情况下，可以加大组织样品的上样量。
  处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。