产品货号:
GS4886
中文名称:
变性电泳预制胶(HEPES体系,7.5%)
英文名称:
PreGel Hepes SDS-PAGE,7.5%,10Well
产品规格:
10块
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品为HEPES缓冲体系的SDS-PAGE变性电泳预制胶,凝胶浓度7.5%,预制胶将凝胶事先配制好,使用者拿来即可上样进行电泳,减去了用户自配凝胶的麻烦,节约了大量的时间。本变性HEPES体系预制胶含SDS,只可跑变性电泳(SDS-PAGE)。预制胶板使用玻璃板作为材质,结合独特的缓冲液(随货已配),效果完全达到并超越传统手工PAGE胶水平。
组分 | 规格 |
非变性电泳预制胶(HEPES体系,7.5%) | 10块 |
1×HEPES SDS-PAGE Buffer粉剂 | 10×500mL |
保存:2~8℃,不可冻存,有效期2年。
预制胶尺寸 | 8.1×7.4×0.15cm |
预制胶板尺寸 | 9.8×8.4×0.41cm |
孔数 | 10孔 |
缓冲体系 | HEPES缓冲体系 |
最大上样量 | 60μL |
电压 | 150~180V |
浓缩胶 | 4%,1.4cm |
货号 | 凝胶浓度 | 电泳时间 | 分离范围(kD) | |
非变性 | 变性 | |||
GS4808 | GS4886 | 7.5% | 30~50min | 40~200 |
GS4809 | GS4887 | 10% | 35~50min | 25~150 |
GS4810 | GS4888 | 12% | 40~50min | 15~150 |
GS4811 | GS4889 | 15% | 40~60min | 10~100 |
GS4812 | GS4890 | 4~15% | 40~55min | 15~250 |
GS4813 | GS4891 | 4~20% | 40~60min | 10~200 |
HEPES体系蛋白分离图谱
兼容电泳槽:
- 北京六一DYCZ-25E、DYCZ-24K、DYCZ-24KS、DYCZ-24KF
- 君意东方JY-SCZ2+
- 天能VE180
- Hoefer Mighty Small (SE 250/SE 260/SE 280)
- Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3/Tetra System)(需按照如下方法改造)
Bio-Rad电泳槽中绿色U型密封条两端凸起为正面。如图所示,将密封条拉出并反转,正面(凸起)朝里,重新装回电泳槽中,并把密封圈周边压实(防止发生漏液) - Life Technology Novex Mini-Cell (需增加特制挡板,如需挡板可联系百奥莱博技术支持申请)
由于百奥莱博预制胶符合大部分国产电泳槽宽度,故使用时无需增加挡板,对于Life品牌电泳槽来说相对较薄,会造成漏液情况,故我们为您提供两片2mm厚度的塑料板(需额外申请),请根据您电泳槽的实际宽度进行相应增加垫片以保证无漏液现象。
挡板使用方法:
将挡板或挡片与胶并排放进电泳槽中,将夹板卡住,向内槽中注入缓冲液,观察是否有漏液情况,如漏液情况还存在,可以再增加一片挡板,直至无漏液现象为止。
电泳缓冲液按照附录2提供的配方配置1×Runing Buffer或直接使用试剂盒提供的粉末缓冲液配置。
- 取胶片
沿拆封口打开小包装,小心取预制胶胶片。 - 装胶片
将预制胶装入兼容电泳槽中,并检漏;如使用伯乐电泳槽,详见兼容设备具体描述。 - 拔梳子
双手平稳缓慢地将梳子拨出。 - 加电泳缓冲液
取300mL 1×Runing Buffer加入电泳槽,内槽加满电泳液,外槽的电泳液最低须加到电泳槽的1/3处,最高不可漫过胶板。 - 上样
将蛋白样品与loading buffer按比例混合均匀,加热处理。 - 电泳
设置参数,开始电泳。 - 拆胶步骤:
- 第一步
电泳结束后,将预制胶取出,用刀片去除—侧硅胶。 - 第二步
将刀片插入两玻璃板之间的缝隙中,从上向下划,直至底部,然后微微上下撬动,即可打开玻璃板。 - 第三步
在胶的右下角切小三角作标记,然后沿着玻璃条轻轻划—刀(防止取胶时,发生粘连使胶破碎),取胶,继续后续的染色或者转膜实验。
- 第一步
- 切记不可冻存,以免发生冻裂,无法使用。
- 如果需要蛋白条带更加清晰、平直,可降低电压,适当延长电泳时间,HEPES体系可降压至100~120V。
- 电泳缓冲液不建议至复使用,由于经电泳后,缓冲液中的离子强度、缓冲能力均发生了变化,故不能确保电泳效果。
- 上样时,枪头不要过度插入梳孔或者斜插加样,以免戳破凝胶造成漏液。
- 电泳后的预制胶均可使用Tris-Glycine转膜液(货号:GS1561、GS1576)进行转膜。需将凝胶浸泡在转膜液中10~15min,使凝胶中的缓冲液得到充分平衡,再进行转膜。
- 如分离<10kD蛋白建议使用小分子量蛋白凝胶制备试剂盒(货号:GS4924)。
问题 | 可能原因 | 建议 |
高浓度条带样品同时出现在相邻泳道 | 样品呈多或加到相邻条带 | 降低上样量。如有溢出,使用缓冲液冲洗上样孔。 |
上样孔破损 | 移除制孔梳时加倍小心。如上样孔破损,换用新凝胶。 | |
凝胶变干 | 凝胶疑似变干,可将凝胶在电泳缓冲液中浸泡—段时间,待凝胶恢复形状后上样。 | |
蛋白分离效果不佳 | 样品含盐量过高 | 使用透析、超滤,或稀释等方法降低盐浓度。 |
电泳体系温度过高 | 提高电泳缓冲液用量,或使用冰袋对缓冲电泳体系温度过高液降温等改善效果。 | |
蛋白电泳溴酚蓝显示扭曲、电泳时间大幅度延长 | 内槽缓冲液泄漏 | 重新夹—下胶板 |
上样孔中有气泡或残留凝胶保存缓冲液 | 上样前,用移液枪吸取缓冲液轻轻冲洗上样孔,将气泡吹出。 | |
样品蛋白浓度过高 | 使用上样缓冲液稀释蛋白样品。 | |
凝胶安装不当,内槽漏液 | 检查内槽密封条、垫片等附件是否安装恰当 | |
电压设置有误,或电泳缓冲液使用不当 | 确认凝胶安装位置,重新安装凝胶。严格按照本说明书提供配方配置电泳缓冲液。 | |
电泳后条带模糊、变黄 | 电泳缓冲液PH | 使用透析、超滤,或稀释等方法降低盐浓度。 |
凝胶浓度选择不当 | 根据凝胶最佳分离范围选用不同浓度凝胶。对于小分子蛋白的分离,请选用较高分离胶浓度的预制胶产品。 | |
蛋白量超出凝胶分离能力 | 提高电泳缓冲液用量,或使用冰袋对缓冲液降温。 | |
电泳时,电流显示异常,不在常规范围之内 | 电泳液的质量、电极是否插反、内槽电泳液是否有漏液现象 | 对于HEPES体系预制胶,电压为150V电泳时,一块胶的电流在80mA左右,2块胶的电流在140mA左右,随着时间增加电流会逐步降低。 |
湿转时,转膜效果不好 | 凝胶浓度、转膜时间的控制、甲醇浓度的选择 | 湿转时120 V恒压转膜60~90min。可根据预制胶上残留预染marker及膜上的预染marker确定转膜效率,并对转膜条件进行适当调整。大分子蛋白尽是选择低浓度的胶。蛋白分子量100 KD以上,可调整甲醇浓度为5%;10~100 KD,可调整甲醇浓度为10%;10 KD以下,可调整甲醇浓度为20%~30%。 |
电泳时泳道拖尾严重,点样孔样品滞留明显 | 样品裂解处理不充分,Loading buffer处理不充分 | 降低裂解前样品浓度,或增加裂解液比例,使样品充分裂解。裂解后样品先稀释,再进行loading buffer处理。 |
样品中含有较大颗粒杂质如细胞碎片、菌体碎片 | 高速离心后,取上清液电泳。 | |
电泳条带呈微笑(中间凹陷,两边突起) | 样品盐离子浓度或表面活性剂浓度过高。 | 稀释样品或对样品进行透析后,再进行loading buffer处理和上样。 |
附录1:如何选择HEPES体系预制胶与Tris-Glycine体系预制胶
参数 | HEPES体系预制胶 | Tris-Glycine体系预制胶 |
跑胶时间 | 150 V,40~50min | 150 V,75~90min;180 V,60min |
分离范围 | 10~250kD蛋白 | 5~250kD蛋白 |
分辨率 | 高 | 中等 |
缓冲液 | 专用缓冲液(本试剂盒配套Buffer) | 普通Tris-Glycine缓冲液(需另购) |
盐耐受度 | 中等 | 高 |
附录2:缓冲液配方
- 1×HEPES Running Buffer:
SDS-PAGE:50mM Tris,50mM HEPES,0.1% SDS,2mM EDTA。推荐货号:GS4892
Native-PAGE:50mM Tris,50mM HEPES,2mM EDTA。推荐货号:GS4814 - 1×Tris-Glycine Running Buffer:
SDS-PAGE:25mM Tris,192mM Glycine,0.1% SDS。推荐货号:GS1559/GS1490
Native-PAGE:25mM Tris,192mM Glycine。推荐货号:GS1497
名称 | 货号 |
固体蛋白上样缓冲液 | GS1472 |
SDS-PAGE蛋白样品上样缓冲液 | GS4359 |
5×蛋白上样缓冲液(非还原) | GS1558 |
2×蛋白上样缓冲液 | GS1515 |
5×蛋白上样缓冲液 | GS1516 |
10×Western膜转印缓冲液 | GS1561 |
10×高分子量印迹膜转印缓冲液 | GS1576 |
双色预染蛋白Marker(15~130kDa) | GS1585 |
三色预染蛋白Marker(10~180kDa) | GS1526 |
蓝色预染蛋白Marker(10~180kDa) | GS4826 |
三色预染蛋白Marker(10~180kDa) | GS4824 |
三色预染蛋白Marker(5~245kDa) | GS4827 |
三色预染蛋白Marker(10~245kDa) | GS4876 |
通用型蛋白染色液 | GS2027 |
高灵敏考马斯亮蓝快速染色试剂盒 | GS1549 |
中分子量蛋白Marker(14.4~97.4kDa) | GS4767 |
中分子量蛋白Marker(14.4~116kDa) | GS4769 |
无毒型蛋白快速染色试剂盒 | GS1479 |
蛋白快速银染试剂盒(质谱用) | GS1419 |
低背景银染试剂盒 | GS1541 |
蛋白快速银染试剂盒 | GS1426 |
10×Tris-Glycine SDS电泳缓冲液(pH8.3) | GS1559 |
10×Tris-Glycine非变性电泳缓冲液 | GS1497 |
Native-PAGE电泳缓冲液粉剂(HEPES体系) | GS4814 |
1×HEPES体系SDS-PAGE电泳缓冲液粉剂 | GS4892 |
相关搜索:变性电泳预制胶(HEPES体系,7.5%),蛋白电泳预制胶,变性蛋白电泳预制胶,变性电泳Hepes预制胶,变性电泳预制胶,变性HEPES预制胶,变性HEPES体系预制胶,HEPES体系变性预制胶,SDS-PAGE预制胶,PreGel Hepes SDS-PAGE,7.5%,10Well