Ni-TED琼脂糖树脂

产品货号：

GS4836

中文名称：

Ni-TED琼脂糖树脂

英文名称：

Ni-TED Resin 6FF

产品规格：

10mL|25mL|100mL

发货周期：

1～3天

产品价格：

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Ni-TED是一种将螯合了镍离子的TED配基键结合在琼脂糖微球上的亲和层析分离介质。由于TED对镍离子超强的螯合能力，使亲和Ni-TED能够耐受高浓度的螯合剂EDTA和还原剂DTT，适用于含有EDTA或DTT等成分的组氨酸标记（His-Tag）的基因工程蛋白质以及能够与Ni²⁺相互作用的生物分子的分离纯化。

产品特点

性能稳定，耐受EDTA、DTT和NaOH，无需预处理即可上样。
较高动态吸附容量，可对接常用层析设备。
无需脱Ni，直接进行NaOH清洗，大大缩短了清洗周期。

基质：6%高度交联的琼脂糖
平均粒径：90μm（45～165μm）
结合载量：10～30mg（His标签蛋白）/mL（介质）
兼容性：所有在Ni-NTA/IDA中正常使用的溶液
流速：≤600cm/h
推荐运行流速：150cm/h
操作压力：≤ 0.3 MPa
储存溶液：20%乙醇
pH稳定性：2~14（短时间，在位清洗），4~13（长时间），4~10（工作）
化学稳定性：2小时内耐受500mM咪唑，100mM EDTA；24小时内耐受10mM EDTA，5mM DTT，1M氢氧化钠，6M盐酸胍，8M尿素
储存温度：4～8℃不可冻存

试剂准备

结合缓冲液：20mM PB，0.5M NaCl，pH7.4。
洗杂缓冲液：20mM PB，0.5M NaCl，1～30mM咪唑，pH7.4。
洗脱缓冲液：20mM PB，0.5M NaCl，500mM咪唑，pH7.4。

注意：

配制缓冲液所需要的水和化学试剂必须是高纯度的，并且使用前要过0.45μm的微孔滤膜。不建议样品和结合缓冲
液中添加咪唑，洗杂缓冲液中的咪唑最优浓度取决于蛋白样品，通常可以选择10～20mM的咪唑浓度。
缓冲液中NaCl是为了抑制树脂的离子交换作用。
一般情况下，洗脱液中的咪唑浓度可洗脱下大多数的目的蛋白，也可适当提高咪唑浓度，增加孵育时间，使洗脱效
果更好。
如果是包涵体纯化，在平衡液、洗杂液、洗脱液中添加8M尿素或6M盐酸胍，效果会更好。
还可以选购百奥莱博自产的结合/清洗缓冲液和咪唑（货号：GS4765），洗脱缓冲液（货号：GS4766），客户可根据样品情况自行决定洗杂缓冲液中的咪唑浓度，用GS4765中自带的咪唑粉末加入结合缓冲液中，配制所需浓度的洗杂缓冲液，推荐洗杂液中咪唑终浓度10～20mM。

以1mL柱装树脂为例。

样品的准备：将宿主细胞碎片通过离心等方式去除，然后过0.45μm的微孔滤膜，用结合缓冲液进行适当稀释。为了获得最大的载量，不要在蛋白样品溶液中添加咪唑。
水洗：用5～10倍柱体积纯水以50~150cm/h清洗树脂，去除乙醇。
平衡：用5～10倍柱体积结合缓冲液以150~600cm/h平衡介质，保证介质中的溶液的组分和pH与样本一致。
上样：样品经过离心、过滤（0.45μm）后以低流速进行上样，建议流速150cm/h。
注：蛋白的结合能力随着裂解物类型、目标蛋白性质、流速、pH变化而变化，流速越低，结合效果越好。纯化时温度比较低时可以减小流速，防止样品和缓冲液黏度变大导致柱压太高。
洗杂：用10～20倍柱体积洗杂液以150cm/h洗杂，清洗非特异吸附的杂蛋白，并收集洗杂液用于后续分析。
洗脱：用5～10倍柱体积洗脱液以低流速进行洗脱，并收集洗脱液。
注：对于洗脱，除了选用咪唑，还有其他方式，例如降低pH值（2.5~5.0）。本产品每次使用后不需要用镍离子再生，但是使用低pH时需要用镍离子再生。
水洗：用5～10倍柱体积纯化水以0.5mL/min清洗树脂介质，去除介质中洗脱液。
保存：用5～10倍柱体积20%乙醇以0.5mL/min清洗清洗介质，在4～8℃保存。
注：4～8℃保存在20%乙醇中可以防止微生物的生长。
再生：用2倍柱体积1mol/l NaOH清洗树脂介质，接着用10～20倍柱体积去离子水冲洗。若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

对于强结合蛋白质或脂类物质，可采用以下流程进行在位清洗：2倍柱体积的1mol/L NaOH，2倍柱体积的4mol/L尿素或3mol/L盐酸胍，2倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇，5～10倍柱体积去离子水，5～10倍柱体积的平衡缓冲液。
建议树脂每使用5～10次后进行一次清洗，具体清洗频率需根据纯化的初始样品的洁净度进行调整。

常见问题

问题	可能原因	解决方案
纯化时目标物不与介质结合或结合量较低	上样速度过快	降低上样流速
	蛋白或脂类在介质中聚集影响结合新的介质	及时有效地清洗介质或更换
	表达条件过于剧烈，His标签被包裹，不能与介质结合	建议做一个空载体作为表达和纯化的对照，确定表达条件是否合适
	初始样品中没有组氨酸标签蛋白	通过基因序列或His标签抗体核实
	目标蛋白出现在流穿液中	目标蛋白没有成功表达或样品和平衡液中pH和组分不正确
洗脱时没有收集到目标物或只收集到少量目标物	洗脱条件不合适	加大洗脱液中咪唑浓度
	洗脱时间不够	降低流速，延长洗脱液和Ni柱的孵育时间
	洗脱体积过小	加大洗脱体积
	目标物在洗脱液条件下出现聚集沉淀	检测目标物在洗脱液条件（pH和盐浓度）下的溶解度和稳定性。可以尝试在洗脱液中加入一些添加剂：如0.2%Triton X-100或0.5% Tween 20
	样品没有经过前处理	样品上柱前必须要经过离心或过滤
洗脱出的组氨酸标签蛋白不纯	在样品和binding buffer混合液中，咪唑浓度过低	在样品和binding buffer混合液中用更高浓度的咪唑浓度。浓度20～40mM是推荐浓度，但是更高的浓度可能也是可以的。
	洗涤不够	重复洗涤步骤以获得最佳纯度。
	标签蛋白可能降解	加入蛋白酶抑制剂（注意EDTA浓度）并在4℃进行操作
	杂质与介质出现非特异性吸附	适当选择添加剂降低非特异性吸附，如0.5%Triton X-100、1.0% Tween 20或50%甘油。

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