产品目录

Sulfo-NHS能够制备用于化学标记，交联和固相固定应用的羧酸酯的胺反应性酯。羧酸(-COOH)可以在碳化二亚胺(如EDC)的存在下与Sulfo-NHS反应，得到半稳定状态的Sulfo-NHS酯，进而与伯胺(-NH2)反应形成酰胺交联。

Sulfo-NHS可溶于水相和有机相。一般用NHS活化会降低改性羧酸酯分子的水溶性，但用Sulfo-NHS活化，由于保留了带电的磺酸盐基团，反而会增加改性羧酸酯分子的水溶性。尽管制备的Sulfo-NHS酯在两步反应方法中足够稳定，但是根据反应溶液的水含量和pH值不同，所有基团会在数分钟到数小时内水解(NHS酯在pH7下的半衰期为4～5小时，pH8为1小时，pH8.6时仅10分钟)。方法里1~3提取和干燥的步骤能够制备出稳定的NHS活化分子，但是迅速使用NHS活化分子与含胺靶标反应，能获得最佳结果。

EDC和Sulfo-NHS的活化反应在pH4.5～7.2时是最有效的，EDC反应通常在pH4.7～6.0的MES缓冲液中进行。Sulfo-NHS活化分子与伯胺的反应在pH7～8下是最有效的，并且Sulfo-NHS-酯的反应通常在pH7.2～7.5的磷酸盐缓冲液(PBS)中进行。为了获得两步反应的最佳结果，在pH5～6的MES缓冲液(或其他非胺非羧酸盐缓冲液)中进行第一步反应，然后在与含胺分子反应之前立即用磷酸盐缓冲液(或其他非胺缓冲液)将pH升高至7.2~7.5。可以用2-巯基乙醇(2-ME)淬灭EDC反应，或者用脱盐柱交换缓冲液，可以简单地去除过量的试剂以及调节反应pH。

别名	N-hydroxysulfosuccinimide；N-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐
CAS号	106627-54-7
分子量	217.14
纯度	>98%
溶解性	溶于水、DMSO、乙醇
结构式

• 需要附加材料
  
  • 活化缓冲液：0.1M MES(2- [吗啉代]乙磺酸)，0.5M NaCl，pH6.0，或用MES缓冲液。
    
  • 磷酸盐缓冲液(PBS)：0.1M磷酸钠，0.15M NaCl，pH7.2～7.5
    
  • 蛋白1：用活化缓冲液制备1mL蛋白，约10mg/mL。
    
  • 蛋白2：在PBS或其他无胺缓冲液(pH7～8)中溶解，1～10mg/mL
    
  • EDC(1-乙基-3- [3-二甲氨基丙基]碳二亚胺)，为了获得最佳效果，使用10倍蛋白1摩尔量的EDC(MW=191.7)。
    
  • 2-巯基乙醇用于淬灭EDC活化反应(可选)。
    
  • 适合对最终活化反应体积的脱盐柱(可选)。如果计划用脱盐柱清洗和更换活化反应体系的缓冲液，必须要平衡脱盐柱，才能C部分中使用。
    
  • 用于淬灭胺反应的羟胺(可选)。
• NHS酯活化
  
  • 将0.4mg EDC(终浓度2mM)直接加入到1mL蛋白质1(50kDa)，EDC是蛋白1的10倍摩尔量。
    
  • 加入1.1mg Sulfo-NHS(终浓度为5mM)。
    
  • 充分混合并在室温下反应15分钟。
    
  • (可选)：加入1.4μL2-巯基乙醇(终浓度为20mM)淬灭EDC活化反应。
    
  • (可选)：用PBS平衡的脱盐柱从多种EDC，EDC副产物，NHS和2-巯基乙醇中分离出活化蛋白1，收集含有活化蛋白质的级分。如果使用280nm处吸收峰来识别含有蛋白质的级分，请注意Sulfo-NHS在260～280nm处吸收强烈。
• 与伯胺反应
  
  • 如果没有进行步骤B.5步骤(即不用脱盐柱更换缓冲液)，则可以使用浓缩的PBS或其它非胺缓冲液如碳酸氢钠将缓冲液pH增加到7.0以上。
    
  • 将蛋白2加入到含有活化蛋白1的溶液中。
    
  • 将溶液充分混合，在室温下孵育2h。
    
  • (可选)：加入羟胺(终浓度为10mM)淬灭反应。过量的羟胺与残留在蛋白1表面上的所有NHS酯反应，使原羧基转化为异羟肟酸。其他可选择的淬灭试剂包括20～50mM Tris，赖氨酸，甘氨酸和乙醇胺。碱的添加会使pH>8，能够促进NHS酯的水解，从而再生出羧基。