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TMB的全称3,3,5,5-四甲基联苯胺为无色物质，作为供氢体，在辣根过氧化物酶作用下被氧化产生蓝色产物，主要吸收峰在370nm和652nm。在加入酸后变黄色，在450nm处有最大吸收峰，TMB灵敏度很高，比色方便，是HRP结合物最常用的底物，在酶联免疫、免疫组织化学中应用比较广泛。本试剂盒适用于酶联免疫实验中，也可用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。

• 溶液D有一定的腐蚀性，需要注意做好防护。
  
• 请在使用前按照上述比例配置所需溶液，现配现用，如果颜色变蓝时应该丢弃。
  
• 请使用完后，将底物溶液A、底物溶液B和溶液C的盖子旋紧，以防止溶液挥发和与空气中的成分发生化学反应。
  
• 长时间放置，蓝色反应产物不稳定，可逐渐退色，故应密切观察显色过程或及时终止显色反应。
  
• 显色一般在室外温度或37℃下反应5～30min，再延长反应时间，可使本底值增高影响实验结果的分析。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 本试剂只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等目的，由此产生的后果概不承担责任。

• 显色前吸取10mL底物溶液A移置一个15mL的干净棕色瓶中，再依次加入0.5mL底物溶液B和2μL溶液C并充分混匀。
  
• 在阴暗避光环境下，分别向微孔中各加入100μL混合反应液，避光显色5～30min，这时蓝色的产物出现。
  
• 再向各孔中加50μL溶液D终止反应，酶标仪450nm读取光吸收值。