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重组HRV 3C蛋白酶是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶。

HRV 3C蛋白酶是识别Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓-Gly-Pro的切割位点的半胱氨酸蛋白酶。本制品具有组氨酸标签，易于通过Ni-NTA树脂去除。在大多数情况下，目标蛋白质用蛋白酶完全切割。切割效率可能因切割位点周围的序列、构象和靶蛋白的溶解度而变化，可以使用更高温度(37℃)下更多的HRV 3C蛋白酶或更长的切割时间来实现高切割效率。

来源：大肠杆菌
比活力：20U/μL
分子量：约27kDa
纯度：＞95%(by SDS-PAGE)

组分	1000U	2000U
重组HRV 3C蛋白酶(20U/μL)	50μL	100μL
说明书	1份	1份

保存：-20℃，有效期3个月，避免反复冻融。长期不用请置于-80℃可保存2年。


25mM Tris-HCl，150mM NaCl，pH8.0，0.5mM EDTA，1mM DTT，50% Glycerol


在1×HRV 3C Buffer中，4℃反应16h，剪切>95%的100μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
1×HRV 3C Buffer：25mM Tris-HCl,pH7.0,150mM NaCl,0.5mM EDTA,and 1mM DTT。


1.在1×HRV 3C Buffer中，加入100μg融合蛋白和一定量的HRV 3C Protease。
2.在4℃恒温反应16小时后，取20μL上述反应液，置于单独的EP管中。
3.向上述EP管中各加入20μL 2X SDS Loading Buffer，样品煮沸5min，取10μL进行SDS-PAGE分析(附图1)。
4.需要指出的是，有些蛋白需要在低温环境下展开实验，这时可以通过延长酶切作用时间或者增加3C酶的用量，来达到完全消化融合蛋白的目的，一般在不增加酶的用量的情况下，酶切过夜效果也是很好的。

SDS-PAGE分析：

图1.底物的用量为100μg，酶的用量依次为0、0.14、0.29、0.43、0.57、0.71、0.86、1、1.14U反应前融合蛋白38kDa，4℃在1×HRV 3C Buffer中反应16小时后的酶切产物为27kDa的GST标签和11kDa的目的蛋白。
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