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TMB的全称为3,3,5,5-四甲基联苯胺为无色物质，作为供氢体，在辣根过氧化物酶作用下被氧化产生蓝色产物，在特殊试剂的作用下沉淀在膜上，主要吸收峰在370nm和652nm，比色方便，是HRP结合物最常用的底物，在免疫组织化学、原位杂交、Western Blot、Southern Blot等膜显色中应用比较广泛，也可以用于原位检测细胞或组织内源性的过氧化物酶。

• 缓冲液C在使用前充分振荡混匀。
  
• 请在使用前按照上述比例配置所需溶液。现配现用，如有颜色变蓝时应该丢弃。
  
• 请使用完后，将底物溶液A、底物溶液B和缓冲液C的盖子旋紧，以防止溶液挥发和与空气中的成分发生化学反应。
  
• 如果所使用的膜较大，请适当增加所配试剂的量，以便完全覆盖膜。
  
• 请正确配制Western Blot所需要的试剂，正确的膜转移，抗体的稀释和冲洗步骤，以保证能够显色和减少杂带的产生。
  
• 显色一般在室外温或37℃反应10～30min，再延长反应时间，会使本底值增高，影响实验结果的分析。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 本试剂只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等目的，由此产生的后果概不承担责任。

• 在免疫印迹实验(Western Blot)中，先将相应的HRP标记的二抗覆盖膜后，于37℃振荡器上振荡1-1.5h，再用1X TBST或1X PBST洗涤膜3～4次，最后一次用1X TBS或1X PBS洗涤膜，将膜转移到阴暗处。
  
• 显色前先将膜浸泡在10mL的缓冲液C中10min，再取500μL左右的底物溶液A和4μL的底物溶液B加入其中，充分混合。
  
• 在37℃阴暗处反应5～30min，这时蓝色产物条带出现。
  
• 照像记录实验结果。